뒷다리 골격근 추출: 쥐 모델에서 뒷다리 골격근을 절제하는 절차

초록

출처: Bonetto, A. et al. 암 악액질 연구를 위한 모델로서의 결장-26 암종 종양 보유 마우스. J. Vis. 특급 (2016년)

이 비디오에서는 마우스 모델에서 뒷다리 골격근을 절제하는 절차를 설명합니다. 절제된 근육은 추가 다운스트림 분석이 있을 때까지 더 낮은 온도에서 보관할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 조직 및 장기 절제

참고: 생화학 또는 분자 생물학 분석에서 조직을 사용하려면 각 장기와 조직의 무게를 측정하고 단편을 사전 라벨링된 cryotube에 즉시 배치할 계획을 세우십시오. 액체 질소에 스냅 동결하고 -80 °C에서 보관하십시오.

1. 조직 샘플이 털로 오염되는 것을 방지하기 위해 전신에 70% 에탄올을 분사합니다.
2. 누운 자세로 해부 침대에 마우스를 놓고 발을 높은 뷰렛 클램프에 부착하여 팔다리를 수직으로 뻗습니다.
3. 뒤몽 집게로 하지 피부를 잡고 구부러진 가는 가위를 사용하여 피부와 근막을 부드럽게 제거하여 하지 밑에 있는 근육 배를 노출시킵니다.
4. 후퇴골의 비복근(gastrocnemius muscle)을 대퇴골(posterior femur)의 외측 및 내측 과두(lateral and medial condyles)에서 기원하여 종골 힘줄(calcaneal tendon)을 통해 종골(calcaneus)에 삽입하여 확인합니다.
   1. 비복근 종골 힘줄을 절단합니다. 뒤몽 겸자로 비복근의 말단부를 잡고 근육 배를 원점 쪽으로 당깁니다. 가위를 사용하여 대퇴골에 최대한 가깝게 원점 근육을 자릅니다. 근육을 접시에 담습니다. 즉시 무게를 달아 액체 질소 튜브에 얼립니다.
      메모: 비복근과 함께 가자미근을 절제하지 않도록 하십시오. 이 경우 겸자로 부드럽게 당겨 가자미를 조심스럽게 제거하십시오.
5. 경골의 전외측 표면에서 원점인 경골 전방근을 확인하고 절제하고 원위 힘줄을 통해 내측 설형 문자에 삽입하는 것을 진행하십시오.
   1. 지렛대를 가지려면 검지와 엄지로 손가락을 잡고 발을 잡습니다. 듀몬트 겸자의 끝을 경골의 표재성 원위 힘줄 바로 아래에 삽입하고 집게를 움직여 뭉툭한 쪽을 사용하여 하부 결합 조직에서 경골 근육 배를 분리할 수 있도록 합니다.
   2. 가늘고 구부러진 가위를 사용하여 원위 힘줄을 자른 다음 경골에 최대한 가깝게 원점 근육을 자릅니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
CD2F1 마우스	할란	60
마취 장치	EZ-마취	이지-7000
10월	티슈텍	4583
저온 유지 장치	라이카	CM1850
코르크 디스크	전자 현미경 과학	63305
마이크로테이너	BD (영어)	365873
Superfrost plus 유리 슬라이드	폭스바겐	제48311-703
스트렙토마이신-페니실린	셀그로	30-002-CI

의 년 호