마우스 장의 전체 마운트 준비: 간단한 장 절개 장치를 사용하여 전체 마운트 준비

초록

출처: Yoneda, M. et al. 마우스 장의 전체 마운트를 신속하게 준비할 수 있는 간단한 장치. J. vis. 특급 (2015)

이 비디오에서는 간단한 장 절개 장치를 사용하여 쥐의 장을 전체적으로 준비하는 방법을 보여줍니다. 그 결과 마운트는 우수하고 균일한 품질을 가지며 조직학적 분석에 사용할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 장치

1. 이 원고에 설명된 대로 고밀도 아세틸 수지의 단단한 블록에서 장치 바닥의 주요 부분을 기계로 가공합니다. 각 끝에서 3mm 높이의 스트립을 만들고 이 2.5mm 홈에서 부품을 기계로 가공하여 로드를 가져옵니다(그림 1 및 그림 2 참조).
2. 끝이 둥글게 처리된 직경 2.4mm의 스테인리스강으로 막대를 만듭니다.
메모:뚜껑의 메인 프레임은 두랄루민 판으로 가공되었습니다.

2. 장치 사용

1. 가위와 장갑을 낀 손가락을 사용하여 복강에서 소장과 결장을 절개합니다. 구부러진 집게로 장간막을 잡고 장에서 부드럽게 당겨 장간막을 제거합니다.
2. 10 또는 20 mL 루어핏 플라스틱 주사기에 맞도록 넓은 쪽 끝을 잘라낸 Gilson 유형 피펫 팁을 사용하여 차가운 인산염 완충 식염수(PBS, pH 7.4)로 장을 헹굽니다.
3. 종이 타월 한 장에 소장(SB)을 놓고 가위를 사용하여 길이가 동일한 3개(근위, 중간, 원위 – SB1, SB2, SB3)로 나눕니다. 맹장을 제거하고 결장을 배치하십시오.
4. 액체가 빠져나갈 수 있도록 가위로 장 부분을 아주 작게 여러 개 자르고 장 위에 종이 타월 한 장을 놓고 손가락으로 제제를 부드럽게 문질러 액체를 짜내고 닦아내십시오.
5. 섹션을 들어 올리고 인산염 완충 식염수 비이커에 담가 이전에 적신 스테인리스 스틸 막대를 삽입합니다.
   메모: 원하는 경우 장을 뒤집을 수 있습니다(뒤집어 놓음).
6. 장치 바닥에 맞도록 자른 카드 또는 여과지에 레이블을 지정합니다. 연필은 거의 모든 솔루션의 영향을 받지 않으므로 가장 좋습니다. 부검 날짜, 실험 코드, 동물 식별 번호를 제시한다.
7. 카드 또는 여과지를 장치 바닥에 놓습니다. 막대와 내장을 장치 바닥의 슬롯에 삽입합니다. 세그먼트의 근위 끝이 표준화된 방식으로 배치되었는지 확인합니다. 근위 끝은 카드 레이블 근처에 있어야 합니다.
8. 장치의 상단 부분을 베이스 위에 놓습니다. 각진 막대를 사용하여 메스 날을 안내하여 섹션을 세로로 자릅니다.
   메모: 티슈가 칼로 움직이지 않도록 손가락으로 부드럽고 조심스럽게 잡으면 도움이 됩니다.
9. 장치의 상단 부분을 제거합니다. 여과지와 티슈를 조심스럽게 제거합니다(여전히 막대에 있음).
   메모: 여과지 아래에 뻣뻣한 카드 조각을 놓으면 들어 올리는 데 도움이 됩니다.
10. 세그먼트가 약간 젖어 있습니다 (장갑을 낀 손가락 끝을 PBS에 담근 상태). 막대를 좌우로 굴려 장을 열고 평평하게 펼칩니다. 그러면 조직이 여과지에 부착됩니다.
11. 심한 병변에 대한 준비 과정을 육안으로 검사합니다.
12. 여과지에 부착된 조직을 고정제가 들어 있는 얕은 수조(또는 샌드위치 상자)로 옮깁니다.
    메모: 티슈가 여과지나 카드에 부착되면 단단히 부착된 상태로 유지됩니다. 제제를 보존하기 위해 다양한 정착제를 사용할 수 있습니다. Carnoy의 액체는 최상의 세포 증식 방법을 위한 이상적인 고정인 장 세포 증식 연구에 사용하는 것이 좋습니다. 그러나, 다른 종말점이 필요한 경우 포르말린 또는 다른 많은 고정제도 사용할 수 있습니다.
13. 고정 후 (보통 3 시간), 제제를 70 % 에탄올로 옮깁니다. 그런 다음 필요할 때까지 샘플을 보관할 수 있습니다. 제제는 직접 연구하거나 H&E 또는 기타 조직학적 염색 기술, 면역조직화학 및/또는 현장 혼성화를 위한 조직학적 샘플 준비에 사용할 수 있습니다.
    메모: 장기간 고정하면 면역조직화학적 반응성 및/또는 현장 혼성화 반응성을 줄일 수 있습니다. 폴리 프로필렌 샌드위치 상자는 많은 수의 준비물을 보관하는 데 이상적입니다.
14. 필요한 경우, 다양한 장 분절의 고정 조직을 '스위스 롤'로 만들고 위에서 설명한 것을 포함하여 모든 범위의 조직학적 방법으로 염색할 수 있습니다. '스위스 롤'을 만들기 위해 여과지에서 장 분절을 제거하고, 칵테일 스틱이나 이쑤시개로 감아 곤충 핀으로 고정하고, 왁스 포매를 위해 가공합니다.
15. 필요한 경우 벌크 조직을 메틸렌 블루로 염색하여 비정상적인 crypt foci를 시각화합니다.
16. 여유롭게 고정된 준비에 점수를 매기십시오.

결과

그림 1. 원래 장치의 사진.원래 장치는 손으로 준비한 여러 금속 조각으로 구성되었습니다. (A) 조립된 장치. (B) 막대가 제자리에 있음을 보여주기 위해 장치의 상단이 제거되었습니다.

그림 2. 새롭게 디자인된 장치의 사진.(A) 뚜껑의 메인 프레임은 두랄루민 판으로 가공됩니다. (B)

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
델린	Ryan Plastics, Earls Barton, 영국		고밀도 아세탈 수지 유사 물질로 충분합니다.
두랄루민 플레이트	Metal Supplies Ltd, Park Road, Dukinfield. SK16 5LP 영국		알루미늄은 1909년으로 거슬러 올라갈 수 있으므로 대체 공급업체를 사용할 수 있습니다
사용 준비가 완료된 장치	Goodlad 박사에게 연락하기 r.goodlad@imperial.ac.uk		공급 세부 정보는 r.goodlad@imperial.ac.uk 연락처

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