쥐 모델에서 암세포의 점막내 접종: 정소성 두경부 암 마우스 모델을 확립하는 절차

초록

출처: Oweida, A. J. et al. 종양 면역 프로파일링 및 치료 반응 평가를 위한 마우스의 편평 세포 암종 세포의 점막내 접종. J. Vis. 특급 (2019년)

이 비디오에서는 편평 세포 암종 세포주를 점막내 접종하여 정소성 두경부암 쥐 모델을 개발합니다. 종양을 가진 마우스는 인간 질병의 임상적으로 관련된 증상과 유사성을 보이므로 암 진행을 연구하고 새로운 치료 전략을 발견하는 데 사용할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 마우스에 세포 주입

1. 세포:기저막 매트릭스(각각 50μL)의 1:1 혼합물을 준비합니다.
2. 먼저 세포를 추가한 다음 기저막 매트릭스를 점차적으로 피펫팅합니다. 기포가 유입되지 않도록 합니다. 동물 주사 직전에 혼합물이 만들어졌는지 확인하십시오. 기저막 매트릭스에 세포를 장기간 추가하면 세포가 매트릭스 혼합물에 침전될 수 있으며, 이로 인해 혼합물이 격렬하게 흔들리기 어려워집니다. 이것은 마우스 간의 종양 크기에 상당한 변동을 일으킬 것입니다.
3. 부드럽게 섞는다. 매트릭스와 관련된 모든 단계가 얼음 위에서 수행되는지 확인하십시오. 기저막 매트릭스는 실온에서 중합됩니다.
4. 접종을 위한 주사기를 준비합니다.
5. 0.5mL 인슐린 주사기(23G)에 100μL의 세포/기저 멤브레인 매트릭스 용액을 로드합니다.
6. 기저막 매트릭스 중합을 피하기 위해 주사기를 얼음 위에 보관하십시오.
7. 이소플루란과 산소(2.5%)가 있는 챔버에 마우스를 배치하여 마취합니다.
8. 주사를 수행하기 전에 마우스가 깊이 마취되었는지 확인합니다(발가락 꼬집음에 대한 반응이 없는지 확인).
9. 바늘을 오른쪽 또는 왼쪽 협측 부위에 삽입합니다. 이것은 입 양쪽에 있는 사용 가능한 열린 공간을 통해 수행됩니다.
10. 마우스의 혀가 방해가 되지 않는지 확인하십시오.
    알림: 혀를 찌르기 쉽기 때문에 혀 종양이 생길 수 있습니다. 필요한 경우 혀를 반대쪽으로 움직입니다.
11. 구강 내부에 있는 동안 주사기를 협측 부위와 평행하게 유지하십시오.
12. 주입할 준비가 되면 주사기를 뒤로 당기고 주사기를 10° 각도로 천천히 삽입합니다.
13. 100μL의 cell/basement membrane matrix suspension을 5초 동안 주입합니다.
14. 모든 재료가 주입되었는지 확인하기 위해 추가로 5초 동안 주사기를 제자리에 유지합니다.
    참고: 종양이 없는 대조군 마우스의 경우, 종양 세포 없이 무혈청 배지와 매트릭스(위에서 설명한 대로)의 혼합물을 주입합니다.
15. 주사기를 부드럽게 빼냅니다.
16. 나머지 마우스에 대해 위의 절차를 계속합니다.
17. 종양이 심하게 나타나기 시작할 때까지 1주일 동안 기다립니다(B4B8 및 LY2 세포의 경우 50–200mm³).

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
HBSS (하이브에스)	써모피셔 사이언티픽	14175079	칼슘 없음, 마그네슘 없음, 페노 레드 없음
Helois 질량 세포 분석기	플루이다임	해당 없음
Matrigel 멤브레인 매트릭스	코 닝	CB-40234B