Chick Chorioallantoic Membrane Harvest: 닭 달걀에서 종양 이식 함유 Chorioallantoic Membrane을 분리하는 방법

초록

출처: Schmidt, L. B. et al. 두경부암에서 신경주위 침습을 평가하기 위한 병아리 융모막 박막 생체 내 모델. J. Vis. 특급 (2019년)

이 비디오는 닭 배아에서 종양을 함유한 융모막막의 분리를 보여줍니다. 수확된 CAM은 추가 다운스트림 애플리케이션에 사용할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. CAM 수확

1. 4% PFA(파라포름알데히드) pH 7.0의 6웰 플레이트를 준비합니다. 계란당 웰 1개, 웰당 2mL.
2. 달걀을 실험실 벤치로 가져옵니다. 주사기에 부착된 바늘을 사용하여 필름 드레싱에 구멍을 뚫고 CAM에 약 300μL의 PFA를 떨어뜨려 CAM을 약간 뻣뻣하게 하여 수확 과정을 용이하게 합니다. 모든 계란에 대해 이 작업을 반복합니다.
3. 가위를 사용하여 CAM이 부착된 달걀 껍질의 위쪽 절반(작동 창이 있는 위치)을 제거합니다(그림 1I). 이 반의 크기를 직경 약 3cm로 줄입니다. 가느다란 집게로 CAM을 잡고 PFA에 넣으면서 달걀 껍질에서 분리합니다.

결과

그림 1: DRG, 세포 이식 및 CAM 수확: 8일차: A. CAM은 파라핀 왁스 멤브레인 제거 후 쉽게 관찰됩니다. BC 미세한 겸자로 DRG를 CAM에 놓습니다. 계란은 필름 드레싱으로 덮여 인큐베이터에 넣습니다. 화살표는 덮인 개구부를 가리킵니다.10일차: E-F. 필름 드레싱이 제거되고 DRG가 배치됩니다(F의 화살표). 지-H. 5μL의 세포 용액을 DRG에서 ~2mm 거리의 CAM에 떨어뜨립니다. 17일: I-L 및 M-P는 CAM을 수확하는 데 사용되는 두 가지 다른 접근 방식을 보여줍니다...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
PFA(파라포름알데히드 용액)	시그마-알드리치	# P6148-1KG	물에 희석하여 4% PFA 용액을 만듭니다.
정밀한 외과 직선형 날카로운 가위	정밀 과학 도구(FST)	#의 14060-09	17일째에 CAM 조직을 채취하는 데 사용됩니다
수정된 Lohmann White Leghorn 알			수정란은 이른 수정일에, 가급적이면 수정 후 첫날에 낳습니다. 이 프로토콜에 사용된 계란은 Michigan State University Poultry Farm에서 가져온 것입니다
매우 세밀한 Graefe 집게, 스트레이트	정밀 과학 도구(FST)	# 11150-10	8일째에 DRG를 CAM에 이식하고 17일째에 CAM 조직을 수확하는 데 사용됩니다

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