Orthotopic Inoculation of Thyroid Cancer Cells into Murine Thyroid: A Procedure to Establish Orthotopic Thyroid Cancer Mouse Model(쥐 갑상선암에 갑상선암 세포의 정소성 접종: 정소성 갑상선암 마우스 모델 수립 절차)

초록

출처: Julia Ramirez-Moya, et al. 생쥐의 종양 성장을 줄이기 위한 MicroRNA의 생체 내 억제. J. Vis. 특급 (2019)

이 비디오는 갑상선암 세포를 마우스 모델의 갑상선에 orthotopic 접종하는 절차를 설명하며, 이는 발암을 평가하고 잠재적인 치료 전략을 발견하기 위한 귀중한 플랫폼 역할을 할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 세포의 갑상선 이정소 접종

1. 세포 준비
   1. Cal62 인간 갑상선암 세포주를 설계하여 GFP와 루시페라아제를 구성적으로 발현하는 형질전환 구조를 과발현합니다. 항생제 내성 또는 유세포 분석으로 GFP 양성 세포를 분류하여 형질전환 세포를 선택합니다.
   2. 항생제(페니실린 및 스트렙토마이신)와 37°C 및 5% CO₂에서 10% FBS가 보충된 DMEM에서 이러한 세포를 성장시킵니다.
   3. 5μL의 PBS에 1 x 10⁵ 세포를 현탁합니다.
2. 마우스의 갑상선에 세포 접종
   1. 100 μL의 진통제(부프레노르핀)와 100 μL의 항생제(세팔로스포린)를 7주 된 BALB/c nu/nu 마우스에 피하주사합니다.주사 부위를 알코올로 소독합니다.
   2. 5 μL의 세포 용액을 마우스의 갑상선에 주입합니다.
      1. 산소와 혼합된 3% 이소플루란을 사용하여 마우스를 마취하고 멸균 흐름 캐비닛의 실체 현미경 아래에 놓습니다.페달 반사(단단한 발가락 꼬집음)로 마취 수준을 평가하고 수술 평면을 유지하기 위해 적절하게 마취 전달을 조정합니다.
      2. 건조를 방지하기 위해 양쪽 눈에 안과 연고를 바르십시오.
      3. 각 마우스에 대해 요오드포비돈으로 목을 소독하고 가위로 피부를 약 2cm 절개합니다. 일단 열리면 침샘을 옮겨 목을 노출시킵니다.
      4. 기관과 갑상선을 노출시키기 위해 해부 집게 및/또는 가위를 사용하여 스트랩 근육을 절개합니다. 10μL 주사기를 사용하여 5μL의 세포 용액을 십자형 연골 측면에 위치한 오른쪽 갑상선엽에 주입합니다.
      5. 타액선의 위치를 조정하고 꼰 코팅된 흡수되지 않는 봉합사를 사용하여 실크로 절개 부위를 봉합합니다.
      6. 상처 부위에 요오드포비돈을 투여하고 마취에서 회복하는 동안 마우스를 열 담요 위에 올려 놓습니다.
   3. 수술 다음 날, 진통제(부프레노르핀)를 피하주사하고 액상 이부프로펜 3mL(40mg/mL)를 음용수 250mL에 1주일 동안 첨가합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Basement Membrane Matrix: Matrigel 기저막 매트릭스 고농도	코 닝	#354248
생체 내 전달 시약: Invivofectamine 3.0 시약	써모 피셔	IVF3005
생체 내 이미징 소프트웨어: IVIS-Lumina II 이미징 시스템	캘리퍼 생명 과학