전기분무에 의한 바이오스캐폴드 제작: 탈세포화된 조직의 세포외 기질에서 파생된 마이크로캐리어 스캐폴드를 생성하는 기술

초록

출처: Kornmuller, A. et al. 조직 특이적 세포 배양 및 전달 플랫폼으로서의 세포외 매트릭스 유래 폼 및 마이크로캐리어 제작. J. Vis. 특급 (2017)

이 비디오는 전기 분무에 의한 세포 외 기질 유래 마이크로캐리어 제조 절차를 보여줍니다. 이러한 마이크로캐리어는 네이티브 조직 특이적 미세환경을 시뮬레이션하며 장기 3D 체외 세포 배양 모델에서 안정적입니다.

프로토콜

1. 전기 분무를 통한 ECM 유래 마이크로캐리어 제작

>참고: 전기 분무 설정에 대한 개요는 그림 1에 나와 있습니다.

1. 이전에 준비된 크라이오밀링된 ECM 현탁액을 37°C에서 100rpm O/N.
   에서 연속 교반으로 배양합니다. 메모: 크라이오밀링된 ECM은 ECM 유래 마이크로캐리어를 제작하는 데 사용되어 현탁액의 균일성을 높이고 전기 분무 중 막힘을 방지합니다.
2. 3mL Luer-Lock 주사기에 ECM 현탁액 3mL를 로드하고 날개 달린 주입 세트를 주사기 구멍에 부착합니다.
   메모: 다양한 바늘 게이지를 사용할 수 있으며, 선택이 결과 마이크로캐리어의 크기와 모양에 영향을 미칠 수 있음을 인식합니다. DAT, DDT, DLV 마이크로캐리어를 제작하려면 25G 바늘을 사용하십시오.
3. 주사기 펌프 내에 주사기를 고정합니다. 바늘을 레토르트 스탠드에 고정하고 바늘 끝을 낮은 형태의 듀어 플라스크 상단에서 4-6cm 떨어진 곳에 수직으로 배치합니다(250–500mL 크기 범위 권장).
4. 바늘 끝에 악....

결과

그림 1. 마이크로캐리어 제작에 사용되는 전기 분무 장치의 개요. A: 주사기 펌프 및 고전압 전원 공급 장치를 포함한 주요 전기 분무 장비의 배치와 액체 질소의 듀어에 대한 바늘의 위치를 보여주는 이미지. B: 전압, 주입 속도에 대한 권장 범위를 포함한 전기 분무 회로도, 그리고 거리.

....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
앨리게이터 클립 리드	폭스바겐	제470149-728
알루미늄 호일	피셔 사이언티픽	01-213-101
원심분리기 튜브(15mL)	사르슈테트	62.554.205
원심분리기 튜브(50mL)	사르슈테트	62.547.205
데시케이터	피셔 사이언티픽	8624426	동결건조된 ECM 및 바이오스캐폴드 보관용
듀어 플라스크	피셔 사이언티픽	10-196-6	낮은 형태, 250 - 500 mL의 부피 범위
ECM (세포외 기질)			문헌[Flynn et al. 2010], Reing et al. 2010, and Wainwright et al. 2010 (ref # 28, 8, 32)에 기술된 바와 같이, 인간 지방 조직, 돼지 진피 또는 돼지 심근으로부터 분리
액체 질소			전기 분무용
동결건조기	랩콘코	7750021	프리존4.5
오비탈 인큐베이터 쉐이커	실로젝스	8.3201E+11	온도 제어(37°C)
레토르트 스탠드	폭스바겐	제470019-526
레토르트 스탠드 클램프	폭스바겐	21573-606
Safety-Lok 주사기	BD (영어)	309606	마이크로캐리어 제작 및 ECM 현탁액을 위한 3 mL Luer Lock 시린지
스쿠풀라	폭스바겐	89259-968	마이크로캐리어 수집용
주사기 펌프	폭스바겐	제10117-490	제어되는 마이크로프로세서
고전압 전원 공급 장치	감마 고전압 연구	ES30P-5W/DDPM	권장 15 - 25kV 전압 범위 가능
날개 달린 주입 세트	테루모	22258092	30cm 튜브 길이, 25G 3/4" 권장; 다른 니들 게이지를 사용할 수 있으며 마이크로캐리어 직경에 영향을 줄 수 있습니다.