척수 추출: 체외 연구를 위해 쥐 척수를 분리하는 프로토콜

초록

출처: Na'ara, S. et al. 암 신경 침입의 체외 모델링: 등쪽 뿌리 신경절 모델. J. Vis. 특급 (2016년)

이 비디오에서는 체외 연구를 위해 마우스 모델에서 척수를 분리하는 단계별 프로토콜에 대해 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 척수 적출

1. CO₂ 챔버를 사용하여 마우스를 안락사시킵니다. 경추 탈구는 전단력으로 인해 신경절 뿌리에 손상을 줄 수 있으므로 피하십시오. 여기서부터 멸균 상태에서 모든 단계를 수행합니다.
2. 동물을 70% 에탄올로 담그십시오. 이 단계는 살균과 모발이 내부 장기를 통해 끌리는 것을 방지하는 데 중요합니다.
3. 마우스를 에탄올로 건조시키십시오. 신경 독성으로 인해 에탄올이 내부 장기와 접촉하지 않도록 하십시오.
4. 마우스를 건조시킨 후 엎드린 위치(앞면이 아래로)에 핀을 사용하여 마우스를 배치합니다. 각 뒷다리와 앞다리에 핀을 놓습니다.
5. 겸자를 사용하여 목부 뒤쪽에서 요추까지 두개골 방향으로 연장하는 정중선 절개를 만듭니다. 다음으로 겸자를 사용하여 진피를 양측으로 올리고 피하 조직을 노출시킵니다.
6. 두개경부 접합부에 도달할 때까지 쥐의 두개골을 촉진합니다. 동물에 수직인 가위를 사용하여 무거운 집게를 사용하여 두개경부 접합부(7^번째 경추)에서 경추 근육과 척추를 절단합니다. 척추를 꼬리 쪽으로 절개하고 요추 수준(뒷다리 수준)에 도달할 때까지 무거운 집게로 척추를 절제합니다.
7. 무거운 집게를 사용하여 요추 수준(5^번째 요추)에서 완전한 꼬리 절개를 수행합니다.
8. 마우스를 위로 굴립니다(위로 향하게). DRG는 경추 부위가 아닌 척추 하부에서 추출하기 때문에 절개 부위를 덮을 필요가 없습니다.
9. 목에서 복부까지의 정중선을 절개하고 피부를 측면으로 후퇴시킨 다음 절개하여 복막을 엽니다.
10. 복막 내부의 내부 장기(간, 비장, 췌장, 위, 장)를 일괄적으로 제거합니다. 다음으로, 후복막 기관(즉, 신장 및 췌장)을 제거합니다. 두개골적으로 흉벽을 엽니다.
11. 겸자와 수술용 칼날을 사용하여 갈비뼈를 자르고 갈비뼈를 척추에서 양측으로 5mm 떨어뜨립니다. 이 시점에서 척추는 신체의 나머지 부분과 분리됩니다.
12. 혈액에서 척추를 차갑게(4°C) 신선한 인산염 완충 식염수(PBS)로 두 번 씻어냅니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
집게	시그마-알드리치	F4142
수술용 칼날	시그마-알드리치	Z309036
가위	시그마-알드리치	S3271 (영문
35mm 페트리 접시, 유리 바닥	드 그루트	우편번호 60-627860
70% 에탄올	시그마
콜드 PBS	생물 산업	02-023-1ᄀ

)