DAPI 염색을 사용한 세포 사멸 스크리닝: 암 세포주에서 IR 유도 클론 생성 세포 사멸의 신속한 스크리닝 방법

Abstract

출처: Kobayashi, D. et al. 형광 현미경에 의한 방사선 유도 클론생성 세포 사멸 모드 평가를 위한 원스텝 프로토콜. J. Vis. 특급. (2017년)

이 동영상은 DAPI 염색 분석을 사용하여 전리 방사선(IR) 유도 암 세포주에서 주요 세포 사멸 프로파일을 스크리닝하는 방법을 보여줍니다. 세포 사멸을 겪고 있는 표적 세포의 DAPI 염색 핵은 뚜렷한 형태를 나타내며 형광 현미경으로 쉽게 식별할 수 있습니다.

Protocol

1. 재료 준비

1. 오토클레이브 커버슬립
   1. 유리 비커에 커버 슬립을 놓습니다.
   2. 유리 비커를 호일로 덮습니다.
   3. 121°C에서 15psi에서 20분 동안 오토클레이브합니다.
   4. 50 °C에서 건조합니다. 배양 후드에 실온에 보관하십시오.
2. 정착 용액 준비: 3% 파라포름알데히드 + 2% 인산염 완충 식염수(PBS) 중 자당
   1. 1,000mL 유리병에 PBS 700mL와 파라포름알데히드 30g을 추가합니다.
      주의: 파라포름알데히드는 부식성이므로 적절한 장갑을 착용하십시오.
   2. 전자레인지를 사용하여 80°C로 가열하여 파라포름알데히드를 완전히 용해합니다.
      주의: 파라포름알데히드 연기는 독성이 있으므로 마스크를 착용하십시오.
   3. 실온에서 하룻밤 동안 그대로 두십시오.
   4. 자당 20g을 넣으십시오.
   5. PBS를 추가하여 총 부피를 1L로 만듭니다.
   6. 50 mL 튜브의 부분 표본. 정착액은 -20°C에서 3년 또는 4°C에서 3개월 동안 보관할 수 있습니다....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
커버 슬립	마츠나미	C013001
파라포름알데히드	시그마-알드리치	P6148-1KG
자당	시그마-알드리치	84097-250지
인산염 완충 식염수	코스모 바이오	16232000
메스	카이 메디컬	20 번, 520-A
35mm 세포 배양 접시	송골매	353001
도립 위상 현미경	시마즈	114-909
X선 조사기	Faxitron 바이옵틱	팩시트론 RX-650
광장 문화 요리	코 닝	431110
슬라이드 유리	마츠나미	프로-11
DAPI 염색 시약	세포 신호 전달	8961 분
형광 현미경	니콘	이클립스 Ni
형광 현미경 DAPI 필터	니콘	U-FUW, BP340-390, BA420IF, DM410
형광 현미경 렌즈 (20×)	니콘	플랜 아포 λ 20X/0.75
형광 현미경 렌즈(60×, 오일)	니콘	플랜 아포 λ 60X/1.40 오일
기름	올림푸스	N5218600
CCD 카메라	니콘	DS-Q2
디지털 이미지 수집 소프트웨어	니콘	NIS-Elements 문서
렌즈 클리너	올림푸스	오타0552
클로로포름	와코	TEL.035-02616