쥐에서 온전한 신장 추출: 쥐 모델에서 신장 캡슐 없이 신장을 얻는 기술

초록

출처: Grainger, N. et al. Isolating and Imaging Live, Intact Pacemaker Regions of Mouse Renal Pelvis by Vibratome Sectioning. J. Vis. 특급. (2021년)

이 비디오에서는 마우스의 후복막 공간에서 신장을 추출하는 절차를 설명합니다. 추출된 신장을 더 미세절개하여 신낭과 주변 지방층이 없는 온전한 신장을 얻을 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 신장 박리

1. 환기 후드에서 3-4% 이소플루란을 흡입하여 마우스를 마취합니다. 발가락 및/또는 꼬리 꼬집 반사의 상실에 의한 심부 마취 유도를 확인한 다음 경추 탈구로 마우스를 안락사시킵니다.
2. 가슴에 에탄올 70%를 바르면 털이 적신다.외부 박리 가위를 사용하여 세로 절개를 통해 복강을 열고 가위날을 동물로부터 멀어지게 하여 내부 장기의 손상을 방지한다.
3. 내부 조직 겸자와 내부 해부 가위를 사용하여 장을 꼬집고 복벽에서 들어 올립니다. 장을 들어 올리는 동안 근위 십이지장과 원위 결장에서 몸에서 벗어나 장의 아래쪽을 잘라내어 신장을 포함하는 후복막 공간에 접근합니다.
4. 신장이 노출되면 개별적으로 추출합니다. 조직 겸자로 요관의 말단부(신장에서 ~4mm 거리)를 부드럽게 꼬집고 들어 올립니다. 해부 가위를 사용하여 꼬집힌 요관 아래를 신장 쪽으로 자릅니다. 신장이 주변 결합 조직에서 분리될 때까지 신장 아래를 계속 절개합니다.
   메모: 진동 절편....

결과

그림 1: 기본 신장 해부학적 구조 및 PKJ 심박 조율기 부위의 위치.(A) RP와 요관의 방향을 보여주는 온전한 신장의 다이어그램. 신장 동맥과 신장 정맥은 각각 빨간색과 파란색으로 표시됩니다. (B) 온전한 신장을 시상면을 따라 절단하여 수질, 유두(유두(유두, 채취관이 수렴하는 원위 수질), 근위 및 원위 RP를 포함한 신장의 내부 측면을 노출시킬 수 있습니다. (C) 수질과 유두를 절제하여 PKJ와 prox RP를 완전히 노출시킬 수 있습니다. (D 및 E)는 각각 PKJ 심박 조율기 영역과 원위 RP에서 투과된 광 이미지를 나타냅니다. 골반의 말단부를 향해 순.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
60mm x 15mm 페트리 접시	시그마 알드리치	P5481	신장 날카로운 해부 접시
흡수성 종이	피셔 사이언티픽	06-666ᅡ	바르기 전에 신장을 말리려면 풀
나6; 129S-GT(로사)26소어/J	잭슨 연구소	13148	GCaMP3 마우스
나6; 129S-GT(로사)26소어/J	잭슨 연구소	24105	GCaMP6f 마우스
나6. FVB-Tg(Myh11-cre/ERT2)1Soff/J	잭슨 연구소	19079	smMHC-CRE 마우스
C57BL/6-TG(Pdgfra-cre)1Clc/J	잭슨 연구소	13148	PDGFRa-CRE 마우스
에탄올	팜코-아페르	재질 보기 SDA 2B-6	해부용
극세 본 가위	정밀 과학 도구	14083-08	내부 해부 가위에 사용
가는 가위	정밀 과학 도구	14060-09	외부 해부 가위에 사용
가는 팁 겸자	정밀 과학 도구	11254-20	신장의 미세 절개에 사용
이소플루란	백스터	NDC 1001936060	마취용
실리콘 엘라스토머	피셔 사이언티픽	NC9285739	실가드 184
학생 Adson 집게	정밀 과학 도구	91106-12	부드럽게 잡고 움직이기 위해 신장
학생 Dumont 집게	정밀 과학 도구	91150-20	내부 해부 겸자에 사용
Vannas 스프링 가위	정밀 과학 도구	15000-03	의 날카로운 해부 및 청소를 위해 고립된 신장

(영문) 년 호 년 년 년 년 년 년 년 년