환자 유래 종양 이종이식: 요로상피세포암을 평가하기 위한 실험용 마우스 모델을 생성하는 기술

초록

출처: Moret, R. et al. 인간 요로상피 세포 암종 및 결장직장암 종양 성장 및 자연 전이에 대한 환자 유래 정소성 이종이식 모델. J. Vis. 특급 (2019년)

이 비디오는 요로상피 세포 암종 진행을 연구하는 데 사용할 수 있는 실험적 이종 이식 쥐 모델을 생성하는 절차를 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. UCC 마우스 모델

1. 절차를위한 마우스 준비
   1. 생후 6-8주 된 암컷 NOD/SCID 마우스를 구합니다. 제모 크림을 사용하여 마우스의 허리를 면도하십시오. 이소플루란(isoflurane, 100% 산소 중 2.5%, 1L/분)으로 유도실에서 마우스를 마취합니다.
   2. 진정제가 투여되면 쥐의 주둥이를 이소플루란 노즈 콘에 넣고 맨손으로 분산 전극에 단단히 접지한 상태에서 누운 자세로 놓습니다.
      참고: 마우스는 발가락 꼬집음에 반응하지 않으면 완전히 진정됩니다.
2. 수확된 UCC 종양 세포를 50μL RPMI 배지에 재현탁합니다. 혈관카테터를 사용하여 UCC 세포를 방광에 주입합니다(그림 1Aa, Ab).
   1. 단극 전기소작기를 설치하고 4W의 전력으로 설정합니다. 24G 멸균 혈관 카테터에 윤활 젤리를 바르고 암컷 마우스의 요도를 통해 삽입합니다.
      알림: 약간의 저항이 느껴질 수 있습니다. 혈관 카테터를 부드럽게 앞으로 밀거나 제거하고 반복합니다. 강요하지 마십시오. 카테터가 들어갈 때 구부러지면 멸균 가이드 와이어를 카테터에 반쯤 삽입하여 안정성을 제공하십시오.
   2. 0.025" 고정 코어 직선 가이드 와이어를 혈관 카테터 끝을 1mm 지나 완전히 삽입합니다.
      알림: 와이어는 1mm 정지 지점을 표시하고 일관성을 보장하기 위해 절차 전에 테이프로 표시됩니다.
   3. 단극 핀을 가이드와이어에 1초 동안 잡고 방광 점막에 전기 자극을 가합니다.
   4. 1cc Luer-Lok 주사기에 새 멸균 혈관 카테터를 부착하고 수집된 세포 200μL를 추출합니다.
      참고: 혈관카테터에서 주사기로 최소 100μL가 손실됩니다. 필요한 세포 현탁액의 부피를 계산할 때 손실 부피를 보상합니다.
   5. 마우스 요도에서 가이드 와이어와 혈관 카테터를 제거합니다. 세포의 주사기가 요도에 부착된 혈관테터를 삽입합니다.
      참고: 진급은 이전보다 쉬워야 합니다.
   6. 마우스 방광에 50μL의 세포를 주입합니다. 세포가 방광 벽에 부착될 수 있도록 혈관 카테터를 제거하기 전에 몇 초간 기다립니다.
      참고: 세포는 방광에 남아 원발성 종양으로 발전합니다.

결과

그림 1: 정사과정 UCC 마우스 모델. (아아) 암컷 NOD/SCID 마우스의 방광에 혈관테터를 삽입하고 가이드와이어를 통해 방광벽에 전기소작 충격을 가했습니다. (아브) Luciferase 태그가 지정된 UCC 종양 세포인 BlCaPt15(2 x 10⁴ 세포) 또는 BlCaPt37(5 x 10⁵ 세포)을 3 x 10⁵ LN 기질 HK 세포를 혈관 카테터를 통해 NOD/SCID 마우스 방광에 주입했습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
제모 크림	교회 & 드와이트 주식회사	1(800)248-8820
이소플루란	Henry Schein 동물 건강	108333
6-8주 된 NOD/SCID 마우스(암컷)	잭슨 랩	1303
집게	대칭 외과 Inc	06-0011
전기수술 발전기	밸리랩	FORCE1C20
이소플루란 유도 챔버	퍼킨 엘머	119038

년