탈세포화된 쥐 신장의 준비: 적출된 쥐 신장에서 무세포 혈관화된 전체 장기 골격을 생성하는 절차

초록

출처: Kim, E. H. et al. 쥐의 탈세포화된 신장 골격 준비. J. Vis. 특급 (2021)

이 비디오는 탈세포화된 쥐 신장의 준비를 설명합니다. 얻어진 무세포 혈관 골격은 장기 이식편의 조직 공학을 위한 유망한 플랫폼 역할을 할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 신장 적출 및 탈세포화

1. 왼쪽 신장과 복부 대동맥 및 하대정맥을 채취합니다.
2. 요관, 흉부 대동맥, 상대정맥 및 복부 대동맥의 가지를 결찰합니다.
3. 10cm 페트리 접시에 Dulbecco의 PBS(DPBS)에서 장기를 수화시켜 유지하십시오.
4. 복부 대동맥과 하대정맥을 23G 카테터로 캐뉼레이션합니다. 잔류 혈액을 제거하려면 캐뉼라를 연동 펌프에 연결하고 DPBS(500mL)와 16U/mL 헤파린으로 37°C에서 5rpm의 속도로 90분 동안 세척합니다.
5. 신장을 탈세포화하려면 100% Triton X-100(1L)으로 3시간 동안 신장을 관류한 다음 40mmHg.
   의 일정한 압력에서 6시간 동안 0.75% 도데실황산나트륨(SDS) 용액(2L)으로 신장을 관류합니다. 메모: 신장은 8시간 후에 투명해집니다.
6. 잔류 SDS를 제거하려면 증류수(6L)에 1% 페니실린을 넣고 18시간(밤새) 샘플을 관류한 다음 멸균 DPBS(500mL) 및 16U/mL 헤파린으로 90분 동안 샘플을 관류합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Polyethelyne 50 튜브, 카테터 튜브 100피트	브레인트리 사이언티픽	.023인치 × .038인치
3-0 RAT의 실크 스풀 혈관 접근/결찰	브레인트리 사이언티픽	SUT-S 110
근막/결합 조직을 절단하는 가는 가위	정밀 과학 도구	14058-09
25 게이지 인치 가이드 바늘 (혈관 카테터 용)	벡턴 디킨슨(Becton Dickinson)	305145
Schwartz microserrefine 혈관 클램프	정밀 과학 도구	18052-01 (스트레이트)
5-0 실크 스풀 혈관 접근/ 마우스의 결찰	브레인트리 사이언티픽	SUT-S 106

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