방광 종양 오가노이드 모델: 방광 오가노이드를 수용자 쥐 방광에 정소성 이식하는 방법

초록

출처: Kim, Y. et al. 마우스 방광 종양 오가노이드의 배양, 조작 및 정소이식.J. Vis. 특급(2020년)

이 비디오에서는 종양 발생에 대한 장기 환경의 역할을 연구하기 위해 배양된 방광 종양 오가노이드를 쥐 방광에 정소성 이식하는 방법을 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 아배양 방광 종양 오가노이드
 

참고: 방광 종양 오가노이드는 직경이 100–150μm에 도달할 때 통과시키는 것이 좋습니다.

1. 종양 오가노이드가 있는 24웰 플레이트의 오가노이드 배지에 500μL의 콜라겐분해효소/디스페이아제를 추가합니다. 피펫은 기저막 매트릭스와 매체를 위아래로 움직입니다. 37°C에서 20분 동안 배양하고 세포를 15mL 튜브로 수확합니다.
   메모: 현미경으로 기저막 매트릭스에서 분리된 오가노이드를 검사합니다. 오가노이드가 기저막 매트릭스에서 분리되지 않으면 배양 시간을 늘리거나 피펫을 더 많이
주입합니다.
2. 예열된 DMEM 5mL를 넣고 400 x g에서 4°C에서 3분 동안 튜브를 원심분리한 다음 상등액을 흡인합니다.
3. 예열된 0.25% 트립신-EDTA 1mL와 10μM Y-27632를 사용하여 펠릿을 재현탁합니다. 37°C 수조에서 5분 동안 배양합니다. 세포를 ....

결과

그림 1: 방광 종양 오가노이드의 정소성 이식.(A) 방광 종양 오가노이드를 누드 마우스에 이식하는 정형소 이식의 개략도. (B) 방광 종양 오가노이드를 정교 이식한 마우스의 방광 및 H&E 염색 절편의 대표 이미지. 가운데 패널에 있는 상자 영역의 확대 보기가 왼쪽 패널에 표시됩니다. 눈금 막대 = 500μm.

....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
15mL 코니컬 튜브	증권 시세	50015
24웰 플레이트	코 닝	3526
인슐린 주사기 1/2개 29G	시나	B299473538
50mL 코니컬 튜브	증권 시세	50050
A8301	토크리스	2939	재고 농도: 25 mM
앱솔루트 에탄올	대정광역시	4023-2304
흡수성 봉합사	헨리 샤인	제039010
고급 DMEM/F-12	열	12634028
CAnN.Cg-Foxn1nu/crl (누드 마우스)	찰스 리버	194
콜라겐분해효소 I형	열	17100017	재고 농도: 20 mg/mL
콜라겐분해효소 II형	열	17100015	재고 농도: 20 mg/mL
콜라겐 분해 효소 / 디스 페이 아제	시그마	10269638001	재고 농도 : 1 mg / mL
DMEM(Dulbecco의 수정된 최소 필수 매체)	지브코	11965-118
DMSO(디메틸설폭사이드)	시그마	D8418
DPBS(둘베코의 인산염 완충 식염수)	웰진	LB 001-02
마트리겔 성장 인자 감소(GFR) 성장 인자 감소(GFR)	코 닝	제354230	플레이트의 오가노이드 배양에 사용
Matrigel 고농도(HC)	코 닝	354248	오가노이드 이식에 사용
1.5 mL 마이크로튜브	액시겐	MCT-150-C
면도날
식염수 완충액	JW중외제약
트립신-EDTA (0.25%)	지브코	25200072
초원심분리 튜브	벡크만 쿨터	331372
Y-27632 이염산염	압몰레	M1817	재고 농도: 10mM

표시기 년 년 표시기 년 년 년 호 명 년 호