고체상 미세추출 시료 채취: 이식편 조직에서 시료 추출을 위한 프로브 기반 기법

Abstract

출처: Stryjak, I. et al. 이식 품질 평가를 위한 화학 생검 사용. J. Vis. 특급 (2020)

이 비디오에서는 사전 적출된 기증자 신장에서 SPME 프로브 기반 대사 산물 추출을 보여줍니다. 추출된 대사 산물은 이식을 위한 장기 품질을 평가하기 위해 대사체 및 지질체 분석을 수행하는 데 사용할 수 있습니다.

Protocol

인간 참가자와 관련된 모든 절차는 인간 복지를 위한 기관, 국내 및 국제 지침에 따라 수행되었으며 지역 기관 검토 위원회의 검토를 거쳤습니다.

1. 프로브 준비

1. 7mm 혼합 모드 흡착제로 코팅된 티타늄-니켈 합금 프로브(길이 40mm, 직경 0.2mm)를 준비합니다. 프로브 수는 전체 절차에서 대상으로 하는 시점과 반복 횟수(시점당 3회 권장)에 따라 다릅니다.
   메모: 추출 단계의 길이와 유형은 연구 모드, 대사 산물의 극성 및 샘플 매트릭스에 따라 조정될 수 있습니다.
2. 2:1 클로로포름:메탄올(v/v)로 구성된 세척 혼합물을 준비합니다. 용액 1.0mL를 각 2.0mL 유리 바이알에 피펫팅하고 이전에 캡을 뚫은 프로브 하나를 각 바이알에 넣습니다.
   메모: 사용하기 전에 모든 프로브를 청소하여 오염 입자를 제거하십시오.
3. 바이알을 교반기에 놓고 교반 속도를 1,200rpm으로 설정합니다. 45분 후 장치를 중지하고 LC-MS 등급의 물로 코팅을 헹굽니다.
4. 코팅은 코팅을 활성화하기 위해 사전 컨디셔닝 단계를 거쳐야 하므로 1:1 메탄올:물(v/v)로 구성된 ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
아세트산	머 크	5330010050	이동상 첨가제
아세토니트릴	연금술	696-34967-4X2.5L	HPLC 용매
암모늄 아세테이트	머 크	5330040050	이동상 첨가제
BENCHMIXER XL 멀티 튜브 볼텍서	벤치마크 사이언티픽	BV1010	와류 믹서
모자	펄란 테크놀로지	5183-2076	블루 scrw tp, 프리 슬릿 PTFE / Si spta, 100PK
클로로포름	머 크	1024441000
Discovery HS F5 Supelguard 카트리지, 3 μm, L × I.D. 2 cm × 2.1 mm	머 크	567570-유	HPLC 가드 컬럼
디스커버리 HS F5, 2.1 mm x 100 mm, 3 μm	머 크	567502-유	HPLC 컬럼
포름산	연금술	497-94318-50ML	이동상 첨가제
유리병(glass vial)	펄란 테크놀로지	5182-0714
HILIC 루나 3 μm, 200A, 100 x 2.0 mm	심폴	PHX-00D-4449-B0	HPLC 컬럼
HILIC SecurityGuard 카트리지, 3 μm, 4 x 2.0 mm	심폴	PHX-AJ0-8328	HPLC 가드 컬럼
이소프로파놀	연금술	231-AL03262500	HPLC 용매
메탄올	연금술	696-34966-4X2.5L	HPLC 용매
나노 순수한 물	머 크	1037281002	HPLC 용매
Q Exactive Focus 하이브리드 사중극자-Orbitrap MS	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	Q 엑액티브 포커스	질량 분석기
SeQuant ZIC-cHILIC 3μm, 100Å 100 x 2.1 mm	머 크	1506570001	HPLC 컬럼
SeQuant ZIC-HILIC 가드 키트 20 x 2.1 mm	머 크	1504360001	HPLC 가드 컬럼
SPME LC 파이버 프로브, 혼합 모드	수펠코	프로토 타입 섬유
UltiMate 3000 HPLC 시스템	써모 사이언티픽(Thermo Scientific	얼티메이트 3000	HPLC 시스템
바이알 인서트(비활성화)	펄란 테크놀로지	5181-8872
XSelect CSH C18 3.5μm 2.1x75mm	바다	186005644	HPLC 컬럼
XSelect CSH C18 VanGuard 카트리지 3.5μm, 2.1x5mm	바다	186007811	HPLC 가드 컬럼