급속 냉동에 의한 암 스페로이드 블록의 준비: 동결 매트릭스 블록에서 암 스페로이드를 보존하는 절차

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초록

이 비디오는 관심 있는 조직 샘플을 초저온으로 동결하여 매트릭스 내부의 스페로이드를 억제하는 기술인 급속 동결을 통한 암 스페로이드 블록의 준비를 보여줍니다.

프로토콜

1. 동결 조직 절단을 위한 암 스페로이드를 함유한 샘플 블록의 준비

작은 집게를 사용하여 챔버 슬라이드에서 콜라겐 젤과 스페로이드 블록을 조심스럽게 들어 올립니다. 콜라겐 젤 블록을 플라스틱 조직학 틀에 넣습니다.
콜라겐 젤을 1x PBS로 짧게 헹구고 실온에서 30분 동안 PBS에 4% 파라포름알데히드(PFA)로 고정합니다.
메모: PFA는 잠재적인 발암 물질이므로 주의해서 다루어야 합니다.
셰이커에서 1x PBS 1.5mL로 콜라겐 젤을 15분 동안 세척합니다. PBS를 교체하고 이전 세척 단계를 3회 반복합니다.
새 플라스틱 조직학 금형의 바닥을 덮기 위해 최적 절단 온도(OCT) 화합물의 얇은 층(약 3mm)을 적용합니다. 고정 및 세척된 콜라겐 젤을 OCT 화합물 위에 놓고 OCT 화합물로 금형을 채워 전체 젤을 조심스럽게 삽입하면서 OCT에 기포가 형성되지 않도록 합니다.
금형을 4°C에서 1시간 동안 그대로 두십시오.
샘플과 OCT 화합물이 들어있는 곰팡이를 액체 질소 위에 떠있는 100mm 페트리 접시에 놓습니다. 샘플을 완전히 급속 동결시킵니다.
나중에 사용할 수 있도록 냉동 샘플 블록을 -80°C에서 보관하십시오.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름	회사	카탈로그 번호
DMEM 세포 배양 배지	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	11995065
소 태아 세럼	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	26140079
항생제-항진균제(100개)	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	15240062
소 혈청 알부민(BSA)	시그마-알드리치	A3803
인산염 완충 식염수(PBS), 산도 7.4	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	10010023
쥐 꼬리에서 콜라겐 유형 1, high 농도	코 닝	354249
Nunc Lab-Tek II 챔버 커버글라스	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	155382
파라포름알데히드 용액	전자 현미경 과학	15710
O.C.T 컴파운드	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	23730571

) ) ) ) ) 년 )

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