마우스 모델의 소변 고갈 및 방광 헹굼: 쥐 방광을 비우고 씻는 카테터 기반 절차

초록

출처: Yu, C. et al. 전기천공법에 의한 마우스 방광 우로텔륨으로의 플라스미드 DNA 전달의 새로운 방법. J. Vis. 특급 (2018)

이 비디오에서는 마우스 모델의 방광을 비우고 헹구는 카테터 기반 절차에 대해 설명합니다. 그런 다음 준비된 마우스를 추가 실험 절차에 사용할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 마취 동물

1. 탁상용 마취 시스템을 사용하여 이소플루란으로 동물을 마취합니다. O₂ 탱크를 켜고 산소 유량계를 1L/min으로 조정합니다.
2. 성인 여성 C57BL/6J 마우스를 유도실에 놓습니다. 전원을 켜고 인덕션을 위해 이소플루란 기화기를 3%로 조정합니다. 마우스는 2분 이내에 마취되어야 합니다. 선제 진통제를 위해 유도실에서 마우스를 꺼낼 때 부프레노르핀 진통제(0.1mg/kg)를 피하로 투여합니다.
   메모: 이 프로토콜에서는 요도 카테터 삽입 중에 작업하기가 더 쉽기 때문에 암컷 마우스가 사용됩니다. 이 프로토콜은 수컷 마우스에도 적용되지만 각별한 주의가 필요합니다.
3. 건조를 방지하기 위해 동물의 눈에 안과 연고를 바르십시오. 마취된 마우스를 코가 콧방울 안에 있도록 하여 가열 패드 위에 올려 놓습니다. 공기 회로 스위치를 돌려 이소플루란이 노즈 콘을 통과하도록 합니다.
4. 접착 테이프로 머리와 노즈콘을 고정합니다. 유지 보수를 위해 이소플루란 기화기를 2%로 조정합니다.
5. 접착 테이프로 팔다리를 고정하십시오. 발가락 꼬집음 테스트를 수행하여 동물이 깊은 마취 상태인지 확인한 다음 복부 부위를 면도합니다.

2. 소변 고갈 및 방광 헹굼

1. 카테터(24G, 길이 2.11cm, 외경 0.045cm)에 윤활제를 바르고 외부 표면이 완전히 덮여 있는지 확인합니다.
2. 카테터를 요도 입구에 삽입하고 방광에 도달할 때까지 천천히 밀어 넣으면 소변이 카테터를 통해 흘러나와야 합니다. 소변 고갈을 돕기 위해 복부를 부드럽게 누릅니다.
   1. 카테터가 방광에 올바르게 삽입되었는지 자동 소변 배출을 관찰하여 확인합니다. 요도와 방광 벽을 뚫지 말고 필요한 경우 윤활제를 여러 번 바르십시오.
3. 피펫으로 소변을 쓰레기 비커에 버리십시오.
4. 80μL의 인산염 완충 식염수(PBS)를 카테터의 바깥쪽 끝에 넣고 다른 쪽 끝은 여전히 방광에 삽입하십시오. 1mL 주사기를 카테터에 조심스럽게 부착합니다. 주사기를 부드럽게 밀어 PBS를 방광에 주입합니다. 방광에 기포가 생성되지 않도록 카테터에 약간의 PBS를 남겨 두십시오.
5. 주사기를 제거합니다. PBS가 방광에서 배출될 때까지 기다립니다. 복부를 부드럽게 눌러 PBS를 배출합니다.
6. 피펫을 사용하여 카테터의 PBS를 폐기물 비커에 버립니다.
7. PBS 세척(2.4-2.6단계)을 두 번 더 반복합니다.
   메모: 이 세탁 단계에서는 부드럽게 작업하는 것이 중요합니다. 카테터에 피가 섞여 나오거나 액체가 자동으로 흘러나오지 않는 것은 보통 요도가 뚫려 있다는 뜻입니다

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
BD 1mL TB 주사기	어부	148232E
Exel International 일회용 Safelet I.V. 카테터	피셔 사이언티픽	Tel.: 14-841-21	24G, 길이 2.11cm, 외경 0.045cm
K&H 소형 동물용 히팅 레스트 매트, 9 x 12 인치	아마존		히트 매트를 종이 타월로 덮으십시오
안과 연고	어부	NC0849514
PBS, pH7.4	생명 기술	10010049
피펫 팁 200 μL	미국 과학	제1111-0206
안과 연고	어부	NC0849514
피펫 팁, 범용 핏; 0.1 - 10 μL	어부	02707438(CS)
부프레노르핀	시그마	B9275-50MG
피펫맨 네오 P2	길슨	F144561
피펫맨 네오 P200N	길슨	F144565
Therio-gel 수의학 윤활제	PBS 동물 건강	Tel.: 353-736
V-1 탁상용 시스템 마취	베트핍	901806
이소플루란	수의사 1명	501017
테이프, 스카치	어부	19047257