전기천공법을 이용한 엑소좀으로의 siRNA 캡슐화: 엑소좀에 siRNA를 로드하는 전기 펄스 기반 기법

초록

출처: Faruqu, F. N. et al. 암세포로의 siRNA 전달을 위한 엑소좀의 준비. J. Vis. 특급 (2018년)

이 동영상은 siRNA를 엑소좀으로 캡슐화하는 전기천공법 기반 방법을 설명합니다. 그런 다음 siRNA가 로드된 엑소좀을 치료에 사용할 수 있습니다.

프로토콜

1. 전기천공법에 의한 siRNA를 엑소좀으로 캡슐화

1. 전기천공을 하기 전에 얼음에서 전기천공(재료 표 참조)을 30분 동안 사전 냉각합니다.
2. 마이크로 원심분리 튜브에서 7.0μg의 엑소좀(PBS의 7 x 10^12p/mL 스톡에서 32μL)과 0.33μg의 siRNA(RNase가 없는 물의 2μM 스톡에서 12μL)를 혼합합니다. 구연산 완충액으로 부피를 150μL로 구성합니다(재료 표 참조). 이 경우 엑소좀과 siRNA의 몰 비율은 1:60입니다.
3. 혼합물을 전기천공법 큐벳으로 옮깁니다. 큐벳의 뚜껑을 닫고 전기천공기의 큐벳 홀더에 놓습니다(재료 표 참조). 회전 휠을 시계 방향으로 180° 회전합니다.
   메모: 큐벳이 전극에 접촉할 수 있도록 휠을 잠금 위치로 완전히 돌려야 합니다.
4. 원하는 전기천공법 프로그램(예: X-01, X-05, A-20, T-20, T-30 등)을 선택하고 시작 버튼을 눌러 전기천공을 시작합니다.
   메모: 성공적인 펄스는 디스플레이에 "OK"를 표시하여 표시됩니다.
5. 전기천공이 완료되면 휠을 시계 반대 방향으로 180° 돌린 후 큐벳을 제거합니다. 추가 처리를 위해 플라스틱 피펫으로 큐벳에서 샘플을 추출합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
아토655-siRNA	유로젠텍	SQ-시르나	(라벨이 붙은-S) UGC-GCU-ACGAUC-GAC-GAU-G55; (레이블이 지정되지 않은AS) CAU-CGU-CGA-UCG-UAGCGC-A55입니다.
유리 피펫	피셔 사이언티픽	1156-6963
아맥사 뉴클레오펙터 I	론자	핵펙터 I	Amaxa의 Nucleofector 키트 사용
EDTA를 함유한 구연산 완충액			0.1954g의 구연산과 0.2087g의 인산이나트륨을 탈이온수 50mL에 섞습니다. EDTA를 0.1mM에 추가합니다. pH를 4.4로 조정합니다.
마이크로분리관	스타랩	S1615-5500	1.5 밀리리터