주기적 산성 쉬프 또는 PAS 염색: 사구체의 구조적 기형을 평가하는 방법

초록

출처: Stevens, M., Oltean, S. 사구체 질환의 마우스 모델에서 신장 기능 평가.J. Vis. 특급 (2018)

이 비디오에서는 신장 사구체의 구조적 이상을 평가하기 위해 PAS(Periodic Acid Schiff) 염색을 수행하는 프로토콜에 대해 설명합니다. PAS 염색 방법을 사용하면 사구체 병태생리학을 적절하게 평가할 수 있습니다.

프로토콜

1. 주기적 산성 쉬프(PAS) 염색

참고: PAS 염색은 사구체 모세혈관 고리의 기저막과 세뇨관 상피를 강조합니다. 이를 통해 사구체 세포, 간막 기질 및 전위 확장, 교모세포종의 잠재적 변화(즉, 비후 및 불규칙성)를 자세히 시각화할 수 있습니다.

1. 파라핀이 함유된 PFA 고정 신장 피질을 5μm 두께의 마이크로톰을 사용하여 폴리-L-라이신으로 코팅된 슬라이드에 절단합니다. 37°C에서 1시간 동안 건조합니다. 단면에 현미경에서 형태를 왜곡할 수 있는 접힘이나 구멍이 없는지 확인하십시오.
2. 실온에서 크실렌(주의, 자극성, 흄 캐비닛에서 사용)을 각각 3분, 100% EtOH를 3분 동안 2회, 95%, 70%, 50% EtOH를 각각 3분 동안 각각 한 번 배양하여 슬라이드를 파라핀화합니다. dH₂O에서 슬라이드를 재수화합니다.
3. 5 분 동안 주기적인 산성 해결책 (주의, 자극제; 증기 장에 있는 사용) (1 g/dL)에 있는 슬라이드를 배양하고, 그 후에 dH₂O. 실내 온도에 100 mL dH₂O를 가진 콘테이너를 이용하십시오.
4. 실온에서 15분 동안 Schiff의 시약(Parasoaniline HCl 6 g/L 및 sodium metabisulfite 4% in HCl 0.25 mol/L)의 슬라이드를 배양합니다. 흐르는 수돗물에 슬라이드를 5분 동안 씻습니다.
5. 흐르는 수돗물에서 슬라이드를 15분 동안 완전히 헹구기 전에 3초 동안 Hematoxylin으로 카운터 스테인합니다.
   메모: 헤마톡실린 염색을 위한 최적의 시간을 결정하기 위해 몇 가지 최적화가 필요할 수 있습니다.
6. 탈파라핀화 프로토콜의 역순을 사용하여 슬라이드를 탈수합니다. 크실렌으로 마무리합니다.
7. 슬라이드를 자연 건조하고 자일렌 기반 장착 매체로 장착합니다.
8. 사구체 구조를 평가하기 위해 400X 배율의 광학 현미경 이미지. 교모세포종의 비후 및 불규칙성, 모세혈관 고리의 붕괴, 섬유성 조직, 경화증, 세포 증식(내피, 포도세포, 중간막 또는 다발에 침투하는 염증성 세포)을 평가합니다.
   메모: 사구체 병태생리학에 대한 포괄적인 평가를 위해서는 세뇨관과 같은 신장의 다른 곳에 있는 병변을 평가해야 합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
PAS(Periodic Acid-Schiff) 염색 시스템	시그마-알드리치	395B-1캐럿
헤마톡실린	시그마-알드리치	H3136 (영문
크실렌	머크밀리포어	108298
Poly-Prep 슬라이드	시그마-알드리치	P0425-72EA
장착 매체	써모피셔 사이언티픽	8030
소수성 펜	아브캠	AB2601
형광등 Miscroscope	라이카 마이크로시스템즈
Image J 분석 소프트웨어	이미지 J

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