유체역학적 신장 골반 주사: 쥐 모델의 신장 세포에 DNA를 직접 전달하는 기술

초록

출처: Woodard, L. E. et al. 신장 내 단백질의 비바이러스 발현을 위한 유체역학적 신장 골반 주사. J. Vis. 특급 (2018년)

이 비디오에서는 핵산 transfection을 위해 마우스 신장의 신장 골반에 플라스미드를 유체역학적으로 주입하는 프로토콜을 제시합니다. 이 기술은 조직 손상을 일으키지 않고 플라스미드를 특정 부위로 강제로 구동하는 높은 정수압의 원리를 활용하여 플라스미드의 장기 특이적 전달을 가능하게 합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 유체역학적 신장 골반 주사 수술 수행

1. 수술을 위해 마우스를 신중하게 선택하십시오.
   참고: 변형주별 차이는 아직 관찰되지 않았지만 가능할 수 있습니다. 대부분의 주사는 C57BL/6 또는 FVB 배경에서 이루어졌습니다. 신장 골반 주사는 생후 6-12주 된 생쥐에서 가장 효과적입니다. 16주 이상의 마우스에서는 불분명한 이유로 루시퍼라제 이미징에 의한 최대 50%의 실패율이 가능합니다. 간에 대한 유체역학적 꼬리 정맥 주사에 대해서도 동일한 연령 관련 실패율이 관찰되었으므로 이는 유체역학 주입의 원리와 관련된 일반적인 제한 사항일 수 있습니다. 같은 맥락에서, 다른 사람들은 섬유성 쥐 간에 유체역학적 꼬리 정맥 주입이 건강한 간만큼 효과적이지 않다는 것을 보여주었으므로 신장 섬유증 환경에서 신장 골반 유체역학 주입이 효과적이지 않을 수 있지만 직접 테스트되지는 않았습니다.

2. 수술을 위한 마우스와 DNA 주사기 준비<....

결과

그림 1. 유체역학적 신장 골반 주사를 위한 올바른 절개 부위와 바늘 배치. A) 절개 부위(빨간색 선)는 척추에서 약 1cm, 마우스의 흉곽 아래 약 1cm에 위치해야 합니다. B) 옆구리 절개를 통해 신장을 노출시킨 후, 신장 골반은 신장 중간에 황색을 띤 작은 투명/흰색 점으로 위치해야 합니다. 주사는 신장 정맥, 신장 동맥 또는 요관을 방해해서는 안 됩니다. 인슐린 주사기의 바늘은 약 0.5cm 깊이로 신장 골반에 직접 삽입되고 2-3초 안에 빠르게 눌립니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
아나세드 자일라진	패터슨 수의학	07-808-1947	마취제 - 통제되지 않는 물질
BD 인슐린 주사기 0.5 mL 29G 1/2 인치	카디널 헬스(Cardinal Health)	309306	필요한 주사기
부프레넥스	약사/수의사		진통제 - 규제 약물
초극세 마이크로 해부 가위	Roboz 수술 기구	RS-5882	수술 도구
Gaymar 히트 펌프	파라곤 메디컬	티피-700	물 순환 히트 펌프
저미네이터 500	Roboz 수술 기구	재질 보기 DS-401	수술 중 수술 도구를 재사용하려면
그레이프 집게	Roboz 수술 기구	RS-5136	수술 도구
Graefe 조직 겸자	Roboz 수술 기구	RS-5153	수술 도구
Halsey 바늘 홀더, 5" 길이	Roboz 수술 기구	RS-7841	수술 도구
열 패드 - 15" x 21" - 최소 3개 필요	파라곤 메디컬	티피22G	Gaymar 히트 펌프와 함께 사용
케타민	약사/수의사		마취제 - 규제 물질
Prevantics 면봉	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	23-100-110	피부 수술 준비용
프롤렌 5-0 봉합사 테이퍼 30"	써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific	NC0256891	피부용 비흡수성 봉합사
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