루시페라제 태그 신경교종 줄기세포 모델: 체외 치료 연구를 위해 루시페라제 태그 신경교종 줄기세포를 준비하기 위한 렌티바이러스 매개 방법

초록

출처: Hu, Z. et al. 환자 유래 신경교종 줄기세포를 사용하여 교모세포종에 대한 잠재적인 조합 요법을 식별하기 위한 신속한 스크리닝 워크플로우. J. Vis. 특급 (2021년)

이 비디오는 렌티바이러스 매개 유전자 전달을 통해 루시페라아제 표지 신경교종 줄기세포를 확립하는 방법을 보여줍니다. 루시페라제는 리포터 유전자 역할을 하며 신속한 약물 스크리닝 실험을 촉진하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

1. Luciferase 태그가 지정된 GSC 준비

1. GSC 배양 및 원심분리로 시작하여 실온에서 3분 동안 70 x g에서 원심분리합니다.
2. 상층액을 제거하고 37°C에서 4분 동안 accutase로 세포를 분해합니다. 200μL 팁과 피펫을 반복적으로 사용하여 세포 펠렛을 해리 및 재현탁합니다.
3. 12웰 배양 플레이트에서 세포를 웰당 2 x 10⁵개의 세포로 희석하고 밤새 세포를 배양합니다.
4. 플레이트의 각 웰에 30μL luciferase-EGFP 바이러스 상등액(역가 >10,^8TU/mL)을 추가한 다음 25°C에서 2시간 동안 1,000 x g에서 세포를 원심분리합니다.밤새 세포를 배양합니다.
5. 다음날 배지를 새로 고치고 48 시간 동안 세포를 배양하십시오.
6. 형광 현미경으로 세포를 관찰하여 GFP 양성 세포의 모양을 확인합니다.
7. 플로우 셀 분류기를 사용하여 GFP 형광이 높은 GSC를 분류하고 선택하여 세포를 추가로 배양할 수 있습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
나-27	지브코	제17504-044	50배
증권 시세	지브코	PHG0313	20 ng / ml
증권 시세	지브코	PHG0263	20 ng / ml
글루타 맥스	지브코	35050061	100배
뉴로기저	지브코	21103049	1배
페니실린-스트렙토마이신	하이클론	SV30010	P: 10,000개/mlS: 10,000ug/ml
나트륨 피루브산	지브코	2088876	100 밀리미터미터

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