SEC 기반 Microglia 유래 세포 외 소포의 분리: Microglia Conditioned Culture Media에서 세포 외 소포를 분리하는 기술

Abstract

출처: Lemaire, Q. et al. 면역 세포 유래 세포외 소포의 특성화 및 세포 환경에 대한 기능적 영향 연구. J. Vis. 특급 (2020년)

이 동영상은 뇌 면역 세포인 미세아교세포에서 유래한 세포외 소포체 또는 EV를 분리하기 위해 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 기반으로 하는 방법을 설명합니다. EV는 면역 반응을 조절하는 매개체를 전달하는 분자 화물 역할을 합니다. 따라서 분리된 EV는 뉴런 면역 반응 중 미세아교세포-뉴런 누화를 연구하기 위한 체외 모델로 사용할 수 있습니다.

Protocol

1. 미세아교세포/대식세포의 일차 배양

1. 미세아교세포의 1차 배양
   1. 37°C 및 5%_CO2에서 10% 엑소좀이 없는 혈청, 100U/mL의 페니실린, 100μg/mL의 스트렙토마이신 및 9.0g/L 포도당이 보충된 Dulbecco의 변형된 독수리 배지(DMEM)에서 배양 상업용 쥐 1차 미세아교세포(2 x 10,⁶ 세포)(재료 표 참조).
   2. 48시간 배양 후 컨디셔닝된 배지를 수집하고 EV의 분리를 진행합니다.
2. 대식세포의 1차 배양
   1. 엑소좀이 없는 혈청과 함께 37°C 및 5% CO₂에서 제조업체가 제공한 배지(재료 표 참조)에서 상업용 쥐 1차 대식세포(¹ x 10 6 세포)를 배양합니다.
   2. 24시간 배양 후 컨디셔닝된 배지를 수집하고 EV의 분리를 진행합니다.

2. EV의 격리

1. 컨디셔닝 매체로부터 EV의 사전 격리
   1. 미세아교세포 ....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
쥐 대식세포 & 미세아교세포 배양 배지	세포 응용 분야	R620K-100	세포 orgin: 정상적인 건강한 쥐 골
쥐 원발성 미세아교세포	론자	RG535
세파로스 CL-2B	GE 헬스케어	17014001
초원심분리기	벡크만 쿨터	A95765
초원심분리기 로터 70.1 Ti	벡크만 쿨터	342184
포도당	시그마-알드리치	G8769 (영문
인산염 완충액 식염수	인비트로젠	14190094	칼슘 없음, 마그네슘 없음
폴리카보네이트 원심분리기 튜브	벡크만 쿨터	355651
페니실린-스트렙토마이신	지브코	15140-122
엑소-FBS	오자임	엑소-FBS-50A-1	엑소좀 고갈 FBS
DMEM Gibco 41966029
원심 분리기	에펜도르프	5804000010
CO2 인큐베이터	써모피셔
pluriStrainer M/ 60 μm	pluriSelect	제43-50060
MonoP FPLC 컬럼	GE 헬스케어		더 이상 사용할 수 없습니다.