쥐 모델에서 형광 유도 종양 절제 및 MSC 시드 골격 이식: 마우스 모델에서 뇌 종양 절제강에 치료용 중간엽 줄기세포를 전달하는 수술 절차

초록

출처: Sheets, K. T. et al. 교모세포종의 이미지 유도 절제 및 치료 줄기 세포 시드 골격의 두개내 이식.J. Vis. 특급 (2018)

이 비디오는 종양 괴사 인자 관련 세포자멸사 유도 리간드 또는 TRAIL을 발현하는 유전자 조작 중간엽 줄기 세포 또는 MSC가 파종된 바이오 골격의 이미지 유도 종양 절제 및 이식을 위한 수술 절차를 보여줍니다. 이러한 치료용 MSC는 뇌종양 치료에 잠재력이 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 형광 유도 절제 및 골격 주입

참고: 수술을 시작하기 전에 모든 도구를 소독하십시오.

1. 입체성 프레임을 형광 해부 실체현미경의 스테이지에 놓습니다.
2. 유도실에서 이소플루란을 흡입한 상태에서 마우스를 마취합니다. 마취가 끝나면 이소플루란 노즈콘 어댑터를 통해 지속적인 흡입 마취로 입체성 프레임에 마우스를 고정합니다. 발열 패드 및/또는 프로브로 체온을 유지하십시오.
   참고: 4-5%의 이소플루란은 유도에 적합하고 2-3%는 유지 관리에 적합하지만 이는 각 마우스에 맞게 조정하고 모니터링해야 합니다.
3. 각막의 건조를 방지하기 위해 눈에 안과 연고를 바르십시오. 두피의 절개 부위를 알코올 3회와 베타딘 물티슈 3회를 연달아 사용하여 소독합니다.
4. 각 팔다리에 발가락 핀치 반사 검사를 수행하고 음성 반응을 확인하여 적절한 마취를 보장합니다. 약 55-65 호흡/분에서 일정한 호흡수를 유지하십시오.
5. 집게를 사용하여 두피를 꼬집고 부드럽게 들어 올립니다. 수술용 가위로 정중선 선형 배부-꼬리 절개를 만듭니다. 절개 부위에 PBS를 세척하고 화장솜 팁 어플리케이터로 원을 그리며 칫솔질하면서 피하 지방을 제거합니다. 이전에 설정된 두개골 창이 완전히 보이도록 피부를 정렬합니다.
6. 18G 바늘을 사용하여 두개골 창 바로 안쪽의 경막을 부드럽게 뚫습니다. 절개 부위가 창 내부를 완전히 따라갈 때까지 반복합니다.
7. 미세한 집게를 사용하여 경막을 벗겨내어 경막을 제거하면 기저에 있는 실질과 종양이 드러납니다.
8. 실내 조명을 끄고 실체현미경 형광 모드를 켜서 U87 mCh-Fl 종양을 찾습니다. 1–200 μL 피펫 팁을 진공 펌프의 튜빙 끝에 로드하여 절제술을 준비합니다.
9. 진공 펌프를 켭니다. 신호가 남지 않을 때까지 형광 조직을 부드럽게 흡인하여 종양을 절제합니다. 진공 펌프를 끄고 피펫 팁을 폐기합니다. 형광을 끄고 실내 조명을 다시 켭니다.
   알림: 출혈을 조절하려면 차가운 PBS로 세척하고 면 팁 어플리케이터로 일정한 압력을 가하십시오. 더 심한 경우, 출혈이 멈춘 후 제거한 후 다른 PBS 세척이 수행되는 한 절제강을 일시적으로 지혈제로 채울 수도 있습니다.
10. 이식 직전에 MSC 파종된 PLA 스캐폴드를 PBS에 천천히 담궈 원치 않는 매체 및 관련 구성 요소를 제거합니다. 골격을 절제강에 이식합니다. 필요한 경우 1μL 피브리노겐(67–106 mg/mL)과 1 μL 트롬빈(400–625 U/mL)을 추가하여 골격을 제자리에 고정합니다.
11. 경막을 제거하고 두개골 창의 뼈 피판을 이미 버린 상태에서 피부를 닫고 수술용 접착제를 바르는 것만으로 상처를 봉합하십시오. 흡입된 마취제에서 동물을 제거하고 가열된 표면에서 회복하도록 합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
마우스 입체 기기 전용	스톨팅	51730	수술 중 안정적인 머리 위치 유지
형광 해부 실체현미경	라이카	M165 FC	절제 중 종양을 실시간으로 촬영할 수 있습니다.
Vetbond 티슈 접착제	3엠	1469	피부 상처를 봉합하는 Sugical 접착제
인공 눈물	아콘	664268	수술 중 눈이 건조해지는 것을 방지합니다.
Webcol 알코올 준비	코비디엔	6818	절개 부위 살균
Betadine 수술용 스크럽	퍼듀 프레딕 컴퍼니	6761815117	절개 부위 살균
코튼 팁 애플리케이터	피셔브랜드	Tel.: 23-400-115	수술 도구
E-vac 흡입 시스템	아르고스	EV310	종양을 절제하는 데 사용되는 진공 펌프
수령 시 TISSEL에서 추출한 피브리노겐 및 트롬빈	백스터		절제공동에 골격을 임시로 고정하기 위해

년 년 시리즈