형광 분자 단층 촬영: 마우스 모델에서 형광 단백질 태그가 지정된 교모세포종 이종이식편의 생체 내 이미징을 위한 이미징 기술

초록

출처: Benitez, J. A. et al., 교모세포종 이종이식편의 생체 내 이미징을 위한 형광 분자 단층 촬영. J. Vis. 특급 (2018)

이 비디오에서는 마우스 모델에서 형광 단백질이 태그된 교모세포종 이종이식편의 생체 내 이미징을 위한 형광 분자 단층 촬영 또는 FMT에 대해 설명합니다. 이 기술은 분자 수준에서 항종양 치료제의 효과를 밝히는 데 유용합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1.FMT 이미징

참고: 실험 목적에 따라 iRFP 태그가 지정된 교모세포종 세포는 치료 전, 치료 중 또는 치료 후에 생체 내에서 모니터링할 수 있습니다. 이미징 목적을 위해 이소플루란 유도 챔버를 사용하여 동물을 마취하고, 스캔하는 동안 이미징 카세트에 유지하고, FMT 이미저의 도킹 스테이션에서 이미지를

촬영합니다.

1. 케이지에서 동물을 꺼내 이소플루란 유도 챔버에 넣습니다. 챔버를 닫고 산소 흐름과 기화기를 3-5%로 켭니다.
2. 동물이 완전히 마취될 때까지, 보통 1-2분 이내에 동물을 모니터링하십시오. 의식이 없는 동물은 외부 자극에 반응해서는 안 됩니다.
3. 마취된 동물을 챔버에서 꺼내고 헤드 어댑터를 먼저 배치한 다음 동물을 아래를 향하게 하여 이미징 카세트에 동물을 넣습니다. 헤드가 카세트 중앙에 있는지 확인하십시오.
4. 카세트의 상판을 위에 놓고 조정 손잡이를 17mm까지 조입니다.
5. 동물이 이미징 카세트에 고정되면 카세트를 FMT 이미저의 내부 도킹 스테이션에 삽입하여 이미징을 진행하고, 여기서 이소플루란을 펌핑하여 동물을 마취 상태로 유지합니다.
6. 소프트웨어 아이콘을 두 번 클릭하여 이미저 및 분석기 소프트웨어를 실행합니다.
7. "실험 탭" 창에서 "데이터베이스"와 "연구 그룹"을 선택합니다.
8. "스캔 탭" 창으로 이동하여 "주제 선택"을 클릭하여 이미지의 피사체를 선택합니다. 또한 "레이저 채널" 패널에서 레이저 채널을 선택합니다. FP635 라벨링 셀의 경우 "laser channel 635 nm"를 선택하고, FP720 라벨링 셀의 경우 "laser channel 680 nm"를 선택합니다.
9. "스캔 탭" 창에서 "캡처" 옵션을 클릭하여 이미지를 획득합니다. 그런 다음 캡처된 이미지의 스캔 필드를 클릭하고 결정된 수의 소스 위치(일반적으로 동측 측의 경우 20-25개 소스 이내)로 드래그하여 스캔 필드를 조정합니다.
10. "재구성 대기열에 추가" 옵션을 선택하고 "스캔 탭" 창에서 "스캔"을 누르십시오.
11. 스캔이 완료될 때까지 기다렸다가 도킹 스테이션에서 이미징 카세트를 제거합니다.
12. 카세트의 상판을 제거하고 동물을 케이지에 다시 넣습니다.
13. 나머지 동물에 대해 1.1–1.12단계를 반복합니다.

2. 이미지 분석

1. 이미저 및 분석기 소프트웨어에서 "분석 탭" 창을 선택합니다.
2. "분석 탭" 창의 "데이터셋 선택" 패널에서 "+" 버튼을 클릭하여 분석할 데이터셋과 주제를 로드합니다.
3. 이미지가 "분석 탭" 창에 로드되면 "분석 탭" 창의 왼쪽 상단 모서리에 있는 타원체 아이콘을 선택하여 관심 영역(ROI) 분석을 수행합니다.
4. "Analysis(분석)" 창에서 "threshold(임계값)" 열을 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하여 "statistic data(통계 데이터)" 패널에서 임계값을 0으로 조정합니다.
5. "Statistic data" 패널의 총 값은 쥐의 뇌에 이식된 형광 태그가 부착된 교모세포종 세포의 신호를 나타냅니다.
6. 나머지 동물들에 대해 2.2-2.4단계를 반복합니다. "분석 탭" 창의 "데이터셋 선택" 패널에서 각각 "+" 또는 "-" 버튼을 클릭하여 새 주제를 로드하거나 제거합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
형광 단층 촬영 시스템	퍼킨엘머	FMT 2500 XL
TrueQuant 이미징 소프트웨어	퍼킨 엘머	7005319
기분부정적 누드 마우스	찰스 리버 연구소	변형 코드 490 (동형접합)	Institutional 의 사전 승인 동물 보호 프로그램 및 the 기관 생물 안전성 위원회 필수.