쥐 신경주위 침습 또는 PNI의 좌골 신경 모델: 암세포의 침입을 이해하기 위한 좌골 신경의 추출 및 처리

초록

출처: Deborde, S. et al. 신경 주위 침습의 생체 내 쥐 좌골 신경 모델. J. Vis. 특급 (2018년)

이 비디오에서는 좌골 신경에 암세포를 주입하여 신경주위 침습의 쥐 모델을 확립하는 절차를 설명합니다. 이 모델은 항암제의 후속 평가를 위해 신경 침습의 규모를 이해하는 데 도움이 될 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 좌골 신경 추출

1. 이전에 좌골 신경에 암세포를 주입한 쥐를 CO₂로 안락사시킵니다. 마우스를 복부 쪽에 놓고 핀을 사용하여 말단발을 안정시킵니다.
2. 주입한 팔다리와 몸통의 등쪽 피부를 제거합니다.
3. 둔기 박리를 사용하여 좌골 신경을 근육 깊숙이 노출시킵니다.
4. 신경은 장골과 천골 사이를 오갑니다. 척수 부위의 신경에 접근하려면 두 개의 뼈를 분리해야 합니다. 먼저 좌골 신경이 위치한 좁은 부분에 닫힌 가위를 삽입한 다음 마우스를 잡고 가위를 엽니다. 섬세하고 절개 중 좌골 신경의 무결성을 유지하십시오.
5. 좌골 신경을 대퇴골 말단부와 척수 근위부에서 조심스럽게 절개합니다.
   메모: 침범된 신경은 극도로 약하며 긴장이나 강압적인 취급에 의해 부서지기 쉽습니다.
6. 먼저 말단부를 잘라 신경을 적출합니다. 신경을 조심스럽게 들어 올리면서 인접한 조직에서 신경을 분리하십시오. 근위부 끝의 신경을 척추에서 나오는 신경에 최대한 가깝게 절단합니다.
7. 그런 다음 Vernier caliper를 사용하여 총 침입 길이를 기록합니다. 이 거시적 추정치는 참고용일 뿐입니다.

2. 신경 처리 및 정량화

1. 절개된 신경을 OCT 화합물에 삽입한다. 신경을 세로로 그리고 가능한 한 곰팡이 바닥에 평평하게 놓으십시오.
2. 카세트에 문자 P(근위부)와 D(원위부)를 표시하여 신경의 근위부와 원위부를 표시합니다.
3. 드라이아이스 위에 박혀 있는 신경을 즉시 절제하지 않는 경우 위에 놓습니다. 샘플은 -80 °C에서 몇 주 동안 보존 할 수 있습니다.
4. 5μm 두께의 저온 유지 장치 마이크로톰을 사용하여 샘플을 절단하고 유리 슬라이드에 절편을 배치합니다. 가능하면 슬라이드당 두 개의 신경 섹션을 맞춥니다. 신경의 근위부를 나타냅니다.
5. H&E 염색을 사용하여 미끄러지는 염색
.
6. 고해상도 디지털 데이터를 제공하는 슬라이드 스캐너로 염색된 신경 부분을 디지털 방식으로 스캔합니다.
7. 이미징 소프트웨어를 사용하여 측정 거리 버튼, 침입 영역 또는 기타 원하는 매개변수를 클릭하여 침입 길이를 정량화합니다. 침습 기간을 잘 추정하려면 동일한 신경의 여러 섹션(2-4)을 사용하십시오.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
마우스			실험 요구에 따른 수와 연령 변수
멸균 수술 도구(가위 및 집게)
Tissue-Tek O.C.T. 컴파운드	폭스바겐	제25608-930
Tissue-Tek 크라이오몰드 몰드	폭스바겐	제25608-916

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