Brain Metastasis Mouse Model: 경동맥내 암세포 주입에 의한 뇌 전이 마우스 모델을 생성하는 방법

초록

출처: Zhang, C. et al. 뇌 전이의 마우스 모델을 생성하기 위한 경동맥내 암세포 주입. J. Vis. Exp. (2017)

이 비디오는 형광 표지된 암세포의 경동맥내 주입에 의한 뇌 전이 마우스 모델의 확립을 보여줍니다. 마우스 모델은 새로운 치료법의 효과와 근본적인 생리학적 메커니즘을 연구하는 데 사용할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 종양 세포 주입을 위한 마우스 준비

1. 케타민/자일라진 칵테일(케타민 100mg/kg, 자일라진 10mg/kg)의 복강내(IP) 주사로 마우스를 마취합니다.
2. 동물의 발을 꼬집어 완전한 마취를 확인하고 반응 부족을 관찰합니다.
3. 유리판(단백질 젤을 주조하는 데 사용됨)에 마우스를 놓고 고무 밴드로 고정합니다.
4. 필요한 경우 면도하거나 소량의 제모 제품을 바르고 종이 타월로 머리카락을 닦아 목덜미를 제거합니다.
   메모: 누드 마우스를 사용하는 경우 체모가 없으므로 이 단계를 건너뜁니다.
5. 포비돈 요오드와 70% 알코올을 바르고 목 피부를 청소합니다.
6. 해부 현미경의 스테이지에 마우스 놓기
7. 수술용 메스로 ~1cm 길이의 피부를 절개합니다.
8. 톱니가 있는 집게로 근육을 무뚝뚝하게 절개하여 아래의 경동맥을 노출시킵니다.
9. 수술용 겸자로 경동맥과 인접한 미주신경을 분리합니다.
10. 수술용 집게를 사용하여 면봉에서 솜을 분리하고 적신 다음 더 작은 면봉으로 만듭니다. 이 완충액 보습 면봉을 주사 부위의 경동맥 아래에 놓습니다.
11. 면봉의 원위부와 근위부에 봉합사를 놓고 느슨한 매듭을 만듭니다. 근위 매듭을 조여 주사 부위로 들어가는 혈류를 차단합니다.
12. 면봉의 경동맥이 신선한 붉은 혈액으로 완전히 압박된 것처럼 보이면 암세포 주사를 진행합니다.

2. 경동맥으로의 암세포 주입

1. 100μL의 암세포를 소용돌이치며 주사기로 끌어들입니다.
2. 해부 현미경 아래에서 31G 바늘(베벨이 위로 향함)을 면봉 위에 있는 경동맥의 내강에 천천히 삽입합니다.
3. 주사기의 세포를 경동맥으로 천천히 주입합니다. 완충된 암세포가 순환계로 밀려 들어갈 때 주변 혈관과 근육 조직의 색이 변하는 것을 현미경으로 관찰할 수 있습니다.
4. 전체 볼륨의 주입이 완료되면 원위 경동맥을 부드럽게 들어 올려 역류를 방지합니다.
5. 말단 매듭을 빠르게 조여 주입 과정을 완료하십시오.
6. 주입이 완료된 후 합자를 조이고 해부 현미경 아래에서 마이크로 가위로 여분의 실크 봉합사를 다듬습니다. 상처 부위를 덮기 위해 분리된 근육을 뒤로 움직입니다. 두 개의 스테이플로 피부를 닫습니다.

3. 외과적 회복

1. 수술한 동물을 회복을 위해 발열 패드로 옮깁니다. 동물들이 의식을 회복하는 데 30-60분 정도 걸릴 수 있습니다. 그 동안 부프레노르핀(0.05mg/kg)을 피하 주사를 통해 수술 후 진통제로 투여합니다.
   메모: 진통제는 현지 IACUC 승인 프로토콜에 따라 제공되어야 합니다.
2. 동물이 깨어나 정상적인 행동을 재개하면 쥐를 원래 서식지로 되돌립니다. 수술 후 며칠 동안 생쥐에게 젤 사료를 제공합니다. 수술 기록을 보관하고 병실에 보관하십시오.

4. 비침습적 In Vivo 이미징

1. 루시퍼라제 리포터 구조체로 표지된 세포의 경우, in vivo imaging system을 사용하여 암세포 주입 효율을 측정합니다.
   메모: 연구 동물에 대한 과도한 스트레스를 피하기 위해 주사 당일에는 이미징을 수행하지 않습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
케타민 염산염 / 자일라진 염산염 용액	시그마-알드리치	K113
일상 실체현미경 Leica M50	라이카	M50	현미경은 모듈식이며 특정 공간 요구 사항에 맞게 고도로 구성할 수
외과 일회용 scapel	인테그라 밀텍스	4-410	피부 절개를 하기 위해
조직 겸자 - 1 x 2 치아	정밀 과학 도구	11021-12	근육을 무뚝뚝하게 절개하기 위해
Dumont #5 - 미러 마감 집게	정밀 과학 도구	11252-23	경동맥을 분리하고 주사를 준비하기 위해
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