방법 논문

In vitro phagocytosis Assay: 실시간 성상세포 매개 시냅토솜 식세포작용을 연구하기 위한 라이브 이미징 기반 방법

2025년 7월 8일

이 논문에서

초록

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출처: Byun, Y. G., Chung, W. S. pH 지시자 접합 시냅토솜을 사용한 성상세포 매개 식세포작용의 새로운 시험관 내 실시간 이미징 분석. J. Vis. 특급. (2018년)

이 비디오에서는 실시간 이미징 분석을 통해 in vitro에서 정제된 성상세포의 식세포 능력을 평가합니다. 이 분석은 성상세포의 식세포 능력을 향상시키거나 억제할 수 있는 화합물을 식별하기 위한 효과적인 스크리닝 플랫폼 역할을 합니다.

프로토콜

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1. Phagocytosis Live-imaging Assay(그림 1)

  1. 성상세포가 합류하는 24웰 플레이트(또는 라이브 이미징을 위해 준비된 플레이트/접시)를 준비합니다(일반적으로 정제 후 7-10일의 배양이 세포 안정화에 이상적임).
  2. 각 웰에서 매체를 제거하고 1mL의 Dulbecco's phosphate buffer salines(DPBS)로 웰을 세 번 세척합니다. 공기 노출을 최소화하려면 우물을 빨리 씻으십시오.
  3. 300μL의 면역판화된 성상세포 염기성 배지(IP-ABM)와 5μL의 pH 지시약 접합 시냅토솜 및 신경교세포 대식작용을 조절할 수 있는 면역판닝 성상세포 조절 배지(IP-ACM)와 같은 추가 인자를 추가합니다.
  4. CO2 인큐베이터에서 플레이트를 40분 동안 배양합니다. 이 단계를 통해 pH 지시약 접합 시냅토솜이 플레이트 바닥에 침전될 수 있습니다.
  5. 결합되지 않은 pH 지시약 접합 시냅토솜이 있는 배지를 제거하고 1mL의 DPBS로 각 웰을 3회 세척합니다.
    주의: 거칠게 씻지 마십시오. 공기 노출을 최소화하려면 우물을 빨리 씻으십시오.
  6. 웰에 테스트하기 위해 추가 인자와 함께 500μL의 IP-ABM을 추가합니다.
  7. 플레이트를 라이브 이미징 기기로 가져가 위치를 선택합니다. 초점, 노출 시간, 밝기 및 LED 전원을 조정합니다.
    메모: 노출 시간, 밝기 및 LED 전력에 대한 설정은 형광 강도와 실험 목적에 따라 다릅니다. pH 지시약 접합 시냅토솜을 사용한 라이브 이미징 분석에서는 일반적으로 노출: ~150–200ms, 밝기: 15, LED 전력: 4–6으로 값을 설정합니다.
  8. 라이브 이미징을 위한 이미지 형식, 시간 간격 및 총 주기 수를 설정합니다. 선택한 위치 수에 따라 시간 간격을 1 또는 2시간으로 설정합니다. 실시간 이미징을 위해 150개 이상의 위치를 선택한 경우 2시간 간격이 권장됩니다.
  9. 라이브 이미징 실험을 시작합니다.

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결과

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그림 1. phagocytosis live-imaging assay의 개략도.

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공개 사항

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선언된 이해 상충이 없습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
pHrodo 빨강, 호박시 미딜 에스테르 몰레큘라 프로브 P36600pH 지시약 접합용
소 태아 혈청(FBS) 지브코제16000-044
DMEM을 참조하십시오.지브코11960-044
디PBS웰진 LB001-02
Phagocytosis 라이브 이미징 분석
줄리 스테이지 나노엔텍
시계열 분석기 V3 플러그인 https://imagej.nih.gov/ij/plugins/ time-series.html
호 년

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태그

pH

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