심근경색의 쥐 모델 생성: 마우스 모델에서 좌측 전방 하행 관상동맥의 영구 결찰을 위한 수술 절차

초록

출처: Lugrin, J. et al. 왼쪽 전방 하행 관상 동맥의 영구 결찰을 사용한 쥐 심근 경색 모델. J. Vis. 특급 (2019년)

이 비디오에서는 좌측 전방 하행 관상 동맥을 영구적으로 결찰하여 심근 경색의 마우스 모델을 생성하는 수술 절차에 대해 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 마취 및 기관 캐뉼레이션

1. 마우스의 무게를 측정하여 마취제, 수술 후 진통제 및 인공호흡기의 일회 호흡량의 복용량을 결정합니다. 가열 패드를 37°C로 예열합니다. 수술 설정은 그림 1에 나와 있습니다.
2. 케타민과 자일라진을 혼합하여 마우스에 각각 80mg/kg 및 10mg/kg의 용량으로 복강내 주사합니다.
3. 전기 면도기를 사용하여 목구멍과 흉곽 왼쪽의 마우스 털을 빠르게 면도하십시오.
4. 꼬리 및/또는 뒷발을 꼬집어 마취 깊이를 확인하고 동물을 발열 패드에 누운 자세로 고정합니다. 눈이 과열되는 것을 방지하기 위해 동물의 머리 아래에 작은 거즈 찜질을 하십시오. 안구 건조를 피하기 위해 안구 젤을 바르십시오.
5. 가열 패드 표면에 접착 테이프로 네 개의 팔다리를 고정합니다. 윗니 아래에 5-0 실크 봉합사 루프를 통과시키고 접착 테이프로 루프의 끝을 가열 패드에 붙입니다. 이렇게 하면 동물의 입을 계속 벌리고 캐뉼레이션을 용이하게 할 수 있습니다.
6. 면도하기 전에 면도한 부위에 제모 크림을 바르고 면봉으로 1분 동안 부드럽게 마사지합니다. 여분의 털과 크림은 거즈로 닦습니다. 0.9% 식염수와 거즈를 한 방울 떨어뜨려 절개 부위를 청소합니다. 면도한 목구멍과 흉부에 멸균 거즈 조각을 바르고 요오도포비돈에 담그십시오.
   메모: 절개 부위에 국소 마취제(리도카인 또는 부피바카인)를 사용하는 것이 좋습니다.
7. 인공호흡기를 일회 호흡량 7mL/kg, 환기 속도 140회/분
   으로 설정합니다. 메모: 이제부터 미세수술 실체현미경으로 작업해 보세요.
8. 목 중앙의 피부를 잡고 작은 가위를 사용하여 꼬리/두부 라인을 따라 0.5cm씩 절개합니다. 타액선의 엽을 분리한 다음 후두와 기관이 보일 때까지 구부러진 절개 겸자로 흉골 근육의 근막을 부드럽게 분리합니다. 탄성 밴드에 부착된 견인기로 개구부의 가장자리를 고정합니다.
   메모: 근육을 절개하지 않고 이 단계를 수행하십시오. 훈련된 작업자는 기관을 시각화하지 않고 구강을 통해 동물을 삽관할 수 있으므로 이 단계는 선택 사항입니다.
9. 혀를 옆으로 부드럽게 잡습니다. 집게를 사용하여 16G 캐뉼라의 뭉툭한 내부 바늘을 기관에 삽입합니다. 인후 절개를 통해 기관에 올바르게 삽입되는 것을 시각화합니다.
10. 캐뉼러를 인공호흡기에 연결하고 배기 튜브를 물에 넣어 올바른 환기를 보장합니다. 기포가 있으면 올바른 삽관을 나타냅니다.
    메모: 수술 중 조직이 젖지 않도록 0.9% 식염수와 요오드포비돈을 적신 멸균 거즈를 목 절개 부위에 놓습니다. 시술 중 수분을 조절하십시오.

2. LAD 관상동맥 결찰술

1. 덕트 테이프에서 왼쪽 앞발을 놓고 마우스를 오른쪽 욕창 위치로 조심스럽게 움직입니다. 동물이 올바른 위치에 있으면 왼쪽 앞다리를 고정합니다.
2. 좌측 가슴근과 대근육 사이의 선을 확인하고 선을 따라 가위로 1cm의 비스듬한 피부를 절개합니다. 절개 무딘 마이크로 가위로 절개 없이 가슴근의 근막을 분리합니다. 탄성 밴드에 부착된 견인기로 분리된 흉근을 유지합니다.
3. 인공호흡기를 3cm H₂O의 호기말 양압(PEEP)으로 설정합니다.
4. 3번째 갈비뼈와 4번째 갈비뼈 사이의 3번째 늑간 공간에서 뭉툭한 집게를 사용하여 흉강을 엽니다. 내흉동맥은 출혈의 위험이 있으므로 만지지 마십시오. 심장이나 폐를 만지지 마십시오. 각 갈비뼈에 하나씩 두 개의 견인기를 흉곽에 적용합니다(그림 2A).
5. 구부러진 미세한 집게로 심낭을 조심스럽게 제거하고 심장과 폐에 해를 끼치 지 않고 잡아 당깁니다.
6. 좌측 전방 하강(LAD) 관상동맥을 찾습니다. LAD 동맥은 왼쪽 귓바퀴 가장자리에서 정점을 향해 뻗어 있는 표면적인 밝은 빨간색 선으로 나타납니다.
7. 바늘 홀더를 사용하여 왼쪽 심방 아래 2-3mm LAD 아래에 7-0 실크 봉합사를 통과시킵니다. 심장 조직이 찢어지지 않도록 실크를 천천히 당깁니다. 합자를 세 개의 매듭으로 묶습니다. 좌심실의 좌측 하단은 결찰 시 즉시 창백해집니다(그림 2B–E).
   메모: 심실강 속으로 너무 깊숙이 들어가거나 너무 피상적으로 있지 않는 것이 중요합니다. 가짜 수술 동물의 경우 봉합사 실크를 LAD 아래로 당겨 조직이 찢어지지 않도록 천천히 제거합니다.
8. 갈비뼈 견인기를 풀고 집게로 3번째 갈비뼈를 잡고 3번째 및 4번째 갈비뼈 아래에 6-0 실크 봉합사로 두 번 통과합니다.
   주의: 심장이나 폐에 천공을 하지 마십시오. 아직 매듭을 조이지 마십시오.
9. 37°C 0.9% 식염수 3방울을 입구에 떨어뜨리고 호기 배기관을 2-3회 호흡 주기 동안 닫아 폐를 적절하게 팽창시킵니다. 봉합사를 조이고 두 번 던져 고정합니다.
10. 근육을 잡고 있는 견인기를 풀고 올바른 위치를 찾도록 도와줍니다.
11. 5-0 봉합사 실크를 두 바늘 꿰매어 흉부 피부를 닫고 두 번 던져 고정합니다. 5-0 봉합사 실크 한 땀으로 목 피부를 닫고 두 번 던져 고정합니다.

결과

그림 1: 수술 설정에 대한 설명.(A) 수술 설정은 수정된 발열 패드, 인공호흡기 및 탄성 밴드에 부착된 견인기로 구성됩니다. (B) 수술 중에 사용되는 가위, 집게, 바늘 홀더 세트. (C) 미니 견인기의 클로즈업. 표시되지 않음: 수술용 실체 현미경.

그림 2: 수술...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
30G 바늘	BD 마이크로랜스 3	304000
블런트 리트랙터	정밀 과학 도구	18200-09
면봉	어플리마드 SA	6001109
해부 가위, 곡선	에스큘랍	BC603R
전기 면도기	레 밍 턴	HC720
제모 크림, Veet	실크 & 프레시 테크.	8218535
마이크로 가위, 곡선형 둔기/무뚝뚝한	에스큘랍	FM013R
1CC 주사기, Omnifix-F	B. 브라운	9161406V
실크 봉합사 5-0, BB	에티콘	K880H의
실크 봉합사 6-0, P-1	에티콘	639시간
실크 봉합사 7-0, BV-1	에티콘	K804
학생 Dumont #7 집게	정밀 과학 도구	91197-00
학생용 가는 집게, 각진	정밀 과학 도구	91110-10
수술용 장갑	웨이타카레	834301
외과용 발열 패드	개인화된 설정
Temgesic sol 0.3 mg/mL 부프레노르핀	인디비어 슈바이츠 AG	N02AE01
16G i.v. 고양이의 기관 튜브 내부 바늘	아보카스-T	G714-A01
범용 S3 현미경, OMPIMD	자이즈
인공호흡기, MiniVent 모델 845	하버드 기구	우편번호 73-0043
점성	알콘	1551535
70% 에탄올
베타딘 60 mL	먼디파마

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