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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. EHS 프로토콜
- EHS 프로토콜 전날 밤, 챔버에 적응할 수 있도록 실온(~25°C, ≈30% 상대 습도)의 환경 챔버에 마우스를 놓습니다.
- 데이터 수집 시스템을 사용하여 하룻밤 동안 30초 간격으로 평균화된 연속 중심 온도(Tc)를 수집합니다.
- EHS 프로토콜 아침에 챔버 온도(즉, 36–37.5°C)를 높이기 전에 마우스가 주간 온도의 정상 범위 이하인지 확인하십시오. 이렇게 하면 마우스가 열이 나지 않고 이 기간 동안 과도한 스트레스를 받지 않도록 할 수 있습니다.
- 마우스가 안정되고 정상적인 휴식 중심 온도 범위 내에 있으면 음식과 물을 제거하고 동물의 무게를 잰다. 챔버 도어를 닫고 챔버 온도를 37.5°C 및 40%–50% 상대 습도 또는 원하는 환경 온도 및 습도의 목표로 높입니다. 보정된 온도 및 습도 모니터로 챔버 온도와 습도를 확인하십시오.
- 의정서 동안 빛과 방해를 최소화하기 위해 암막 커튼으로 챔버를 둘러쌉니다. 원격 IR 조명 카메라를 통해 프로토콜 중에 마우스를 지속적으로 모니터링합니다. 두 번째 카메라는 러닝 휠 가까이에 배치된 온도 및 습도 모니터에 초점을 맞춥니다. 동물 근처의 정확한 온도 판독값을 보장하기 위해 환경 챔버 설정값에 대한 컨트롤러를 조정합니다.
- 챔버가 온도 모니터의 두 번째 카메라로 측정한 목표 온도에 도달하면(~30분 소요 가능) 챔버 도어를 빠르게 열고 마우스를 강제 실행 휠에 넣습니다.
- 2.5m/min의 속도로 강제 주행 휠 프로토콜을 시작하고 마우스가 0.3°C의 Tc에 도달할 때까지 10분마다 속도를 41m/min씩 높입니다. 마우스가 이 중심 온도에 도달하면 명백한 의식 상실, 뒤로 넘어지거나 실신, 계속 달리거나 바퀴를 잡을 수 없는 증상이 제한될 때까지 속도를 일정하게 유지하십시오. 마우스가 물리적 반응의 징후 없이 휠에서 뒤로 세 번 회전할 때 이 시점을 확인합니다. 또는 현지 IACUC 규칙에 따라 인도적인 종말을 식별하여 프로토콜 중지 시기(예: Tc ~43 °C일 때)를 결정합니다. 이 종점은 기본적으로 모든 마우스에서 증상 제한보다 약간 높습니다.
- 급속 냉각 프로토콜(R)을 수행하려면 마우스가 증상 제한에 도달하면 휠을 멈추고 강제 주행 휠에서 즉시 제거하십시오. 마우스의 무게를 측정하고 가정용 케이지에 다시 넣어 실온에서 회복합니다. 이 시간 동안 챔버 도어를 열어 두고 인큐베이터 설정값을 실온으로 되돌려 챔버가 빠르게 냉각될 수 있도록 합니다. 이 절차는 >99%의 장기 생존율을 제공합니다.