운동 열사병 마우스 모델: 운동 열사병의 기전을 연구하기 위한 프로토콜

초록

출처: King, M. A. et al. 마우스의 운동 열사병의 전임상 모델. J. Vis. 특급 (2021).

이 비디오에서는 마우스 모델에서 운동 열사병(EHS)을 연구하기 위한 단계별 프로토콜에 대해 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. EHS 프로토콜

1. EHS 프로토콜 전날 밤, 챔버에 적응할 수 있도록 실온(~25°C, ≈30% 상대 습도)의 환경 챔버에 마우스를 놓습니다.
2. 데이터 수집 시스템을 사용하여 하룻밤 동안 30초 간격으로 평균화된 연속 중심 온도(Tc)를 수집합니다.
3. EHS 프로토콜 아침에 챔버 온도(즉, 36–37.5°C)를 높이기 전에 마우스가 주간 온도의 정상 범위 이하인지 확인하십시오. 이렇게 하면 마우스가 열이 나지 않고 이 기간 동안 과도한 스트레스를 받지 않도록 할 수 있습니다.
4. 마우스가 안정되고 정상적인 휴식 중심 온도 범위 내에 있으면 음식과 물을 제거하고 동물의 무게를 잰다. 챔버 도어를 닫고 챔버 온도를 37.5°C 및 40%–50% 상대 습도 또는 원하는 환경 온도 및 습도의 목표로 높입니다. 보정된 온도 및 습도 모니터로 챔버 온도와 습도를 확인하십시오.
5. 의정서 동안 빛과 방해를 최소화하기 위해 암막 커튼으로 챔버를 둘러쌉니다. 원격 IR 조명 카메라를 통해 프로토콜 중에 마우스를 지속적으로 모니터링합니다. 두 번째 카메라는 러닝 휠 가까이에 배치된 온도 및 습도 모니터에 초점을 맞춥니다. 동물 근처의 정확한 온도 판독값을 보장하기 위해 환경 챔버 설정값에 대한 컨트롤러를 조정합니다.
6. 챔버가 온도 모니터의 두 번째 카메라로 측정한 목표 온도에 도달하면(~30분 소요 가능) 챔버 도어를 빠르게 열고 마우스를 강제 실행 휠에 넣습니다.
7. 2.5m/min의 속도로 강제 주행 휠 프로토콜을 시작하고 마우스가 0.3°C의 Tc에 도달할 때까지 10분마다 속도를 41m/min씩 높입니다. 마우스가 이 중심 온도에 도달하면 명백한 의식 상실, 뒤로 넘어지거나 실신, 계속 달리거나 바퀴를 잡을 수 없는 증상이 제한될 때까지 속도를 일정하게 유지하십시오. 마우스가 물리적 반응의 징후 없이 휠에서 뒤로 세 번 회전할 때 이 시점을 확인합니다. 또는 현지 IACUC 규칙에 따라 인도적인 종말을 식별하여 프로토콜 중지 시기(예: Tc ~43 °C일 때)를 결정합니다. 이 종점은 기본적으로 모든 마우스에서 증상 제한보다 약간 높습니다.
8. 급속 냉각 프로토콜(R)을 수행하려면 마우스가 증상 제한에 도달하면 휠을 멈추고 강제 주행 휠에서 즉시 제거하십시오. 마우스의 무게를 측정하고 가정용 케이지에 다시 넣어 실온에서 회복합니다. 이 시간 동안 챔버 도어를 열어 두고 인큐베이터 설정값을 실온으로 되돌려 챔버가 빠르게 냉각될 수 있도록 합니다. 이 절차는 >99%의 장기 생존율을 제공합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1080P HD 4 보안 카메라 4CH 홈 비디오 보안 카메라 시스템 (1TB HDD 2MP 야경 카메라 CCTV 감시 키트	라뷰
BK 정밀 다중 범위 프로그래밍 가능 DC 전원 공급 장치 Model 9201	BK 정밀도
Layfayette 전동 휠 모델 #80840B	레이파예트
과학 환경 챔버 Model 3911	써모포마
트레이닝 휠	콜럼버스 Inst
에너자이저 전원 공급 장치	스타 생명과학
G2 이미터 외.	스타 생명과학
플랫폼 수신기 외.	스타 생명과학

포함)