급성 담췌구염 모델: 췌관관 주입을 통해 급성 담췌구염 마우스 모델을 생성하는 방법

초록

출처: Serra, M. B. et al. Sodium Taurocholate는 C57BL/6 마우스에서 중증 급성 췌장염을 유발했습니다. J. Vis. 특급 (2021년)

이 비디오는 타우로콜레이트나트륨의 췌장 주입을 통해 급성 담췌장염이 있는 마우스 모델을 생성하는 절차를 설명합니다. 이 모델은 췌장에서 타우로콜산나트륨에 의해 유발된 병태생리학적 변화를 연구하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 개복술

1. 자일라진(10mg/kg)과 케타민 용액(80mg/kg)으로 동물을 마취하고 1mL 주사기와 13 x 0.45mm 바늘 26G 1/2을 사용하여 피하(체중 0.1mL/10g)합니다. 발가락을 꼬집어 충분한 마취 깊이를 확인하십시오. 가열된 패드를 사용하여 체온을 조절합니다. 모든 수술 재료가 멸균되었는지 확인하십시오.
2. 5% 포비돈-요오드 용액으로 복부를 청소하고 트리머를 사용하여 가슴과 하복부 사이의 털(약 2cm²)을 제거합니다. 70% 알코올로 수술 부위를 청소하십시오.
3. 수술 테이프를 사용하여 수술 보드에서 동물을 고정시킵니다. 가위를 사용하여 복부 위쪽 부분에서 수평으로 5mm, xiphoid 과정에서 1cm 아래 피부를 자릅니다. 복막을 자르는 과정을 반복합니다. 이것은 충치의 노출을 최소화하는 개복술을 초래할 것입니다.

2. 췌장 찾기 및 노출

1. 견인기의 도움으로 간을 장에서 ~1cm 떨어진 쥐의 머리 쪽으로 당깁니다.
2. 타우로콜레이트나트륨(sodium taurocholate)을 주입할 췌장 부위(췌장 머리)를 찾습니다. 간을 참조하여 십이지장을 찾습니다—간 아래, 오른쪽(마우스를 볼 때 왼쪽). 십이지장은 소장의 첫 번째 부분이며 위의 마지막 부분과 연결되어 있습니다.
3. 겸자를 사용하여 간을 동물의 머리 쪽으로 들어 올리고 소장 부분을 부드럽게 당깁니다. 소장의 양쪽 측면 끝을 6-0 폴리프로필렌 봉합사로 고정하여 총담관의 원위 부분을 더 잘 볼 수 있습니다.

3. 중증 급성 췌장염 유도

1. 역행성 주입이 간으로 누출되는 것을 방지하기 위해 미세혈관 클립으로 근위 총담관을 일시적으로 폐색합니다. 총담관은 십이지장의 간 쪽에서 볼 수 있으며 십이지장과의 접합부는 흰색으로 보입니다. 장기를 복강 밖으로 노출시킨다.
2. 0.54mm 폴리에틸렌 튜브에 연결된 0.4mm 바늘로 총담관에 접근하기 위해 양수 주위 영역(소장 벽의 희끄무레한 부분)에 구멍을 뚫습니다.
3. 8-0으로 원위 총담관을 일시적으로 폐색합니다. 타우로콜산나트륨 용액이 십이지장으로 누출되는 것을 방지하기 위한 봉합사.
4. 주입 펌프를 시작하고 2.5% 타우로콜레이트 나트륨 용액(0.9% 식염수로 희석) 주입을 3분 동안 10μL/10g 체중의 일정한 속도로 프로그래밍합니다.
5. 주입 후, 마이크로 혈관 클립을 제거하고, 임시 8-0 봉합사, 담췌관에서 주사 바늘을 주사 바늘로 담즙의 생리적 흐름을 재구성합니다.
6. 마지막에는 6-0 비흡수성 모노필라멘트 폴리프로필렌 봉합사로 복부를 봉합합니다. 개복술과 최종 봉합사 사이의 시간은 최대 30분이어야 합니다(그림 1 참조).
7. 수술 후, 동물들을 나무 부스러기와 물과 음식이 갉아진 폴리에틸렌 상자에 수용합니다.
8. 대조군 마우스는 실험용 마우스와 동일한 방식으로 처리하되 주입액이 식염수로만 구성되도록 합니다. 수술 및 삽관으로 인한 염증성 편향을 제거하기 위해 대조군(SHAM)에서 수술 절차와 식염수 주입(10mL/분, 3분 동안)을 수행합니다.
9. 수술 후 회복 후부터 8시간마다 트라마돌 12.5mg/kg을 피하주사로 투여합니다.

결과

그림 1: C57BL/6 마우스에서 2.5% 타우로콜산나트륨에 의한 중증 급성 췌장염 유도 개략도.(A) 담낭; (B) 총담관; (C) 췌관; (D) 문맥; (E) 미세혈관 클립; (F) 천자 부위(폴리에틸렌 튜브에 부착되고 주입 펌프에 연결된 바늘); (G) 총담관에 일시적인 바늘 고정.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
0.4 mm 바늘	INTRAG 메디컬 테크	90183210	30지
0.54mm 폴리에틸렌 튜브	타이곤	730010
스티로폼 블록
마우스 장착용 마스킹 테이프	미스너	1236
주입 펌프는 10μL/min으로 예정되어 있습니다.	Havard aparatus-연동 펌프 시리즈	MA1 55-7766	모델 66 소형 연동
가위와 집게
방부제 프로비딘 요오드	화 이자	12086또는	방부제
70% 에탄올	시그마	459836	700mL 100% 에탄올과 300mL dH2O 혼합
면도날	주	BDK9A1GHK6	삼분법의 경우
나트륨 타우로콜레이트	시그마-알드리치	86339- 1지	CAS 번호 : 345909-26-4
Microvessel 클립	메디콘 서지컬	56.87.35	근사기, 개폐 4.0mm, 폐쇄 압력 30-40g
6-0 프롤렌	바이오라인	5162	봉합 라인
케타민 NP (클로리드라토 데 덱스트로세타미나) 50mg/mL	크리스탈리아
자일라진 2%	(주)신텍
멸균식염수(0.9%(wt/vol) 식염수)	파머스	105851
메틸 블루	시그마-알드리치 화학제품	M5528
Desmarres 견인기 13mm 너비	로보즈	RS-6672