마우스 모델의 횡방향 대동맥궁 밴딩: 좌심실에서 고압 유도를 위한 마우스의 최소 침습 기술

초록

출처: Zaw, A. M. et al. 마우스의 최소 침습적 횡단 대동맥 수축. J. Vis. 특급 (2017년)

이 비디오에서는 압력 과부하로 인한 심부전을 조사하기 위해 마우스에서 최소 침습적 횡단 대동맥 수축에 대한 실험 프로토콜을 시연합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 작업 현장 준비

1. 75% 이소프로필 알코올로 작업 현장을 소독합니다. 대상 동물의 심장 및 호흡수 변화를 피하기 위해 가열 패드 온도를 37°C로 조정합니다.
2. 중력 변위 멸균기로 121°C에서 30분 동안 멸균하거나 기타 적절한 방법으로 멸균된 수술 기구를 사용하십시오.
3. 그림 1에서 볼 수 있듯이 2-4개의 30게이지 바늘을 가져다가 바늘 홀더로 구부려 결찰 및 조직 분리를 위한 도구를 만들고 견인기로 사용합니다. 이제 구부러진 바늘을 수술에 사용하기 위해 면 어플리케이터에 장착합니다.
4. 27게이지 바늘을 무디게 하고 바늘 홀더로 90º 구부립니다. 결찰 단계에서 0.4mm 스페이서를 만들기 위해 단단한 표면을 문질러 팁을 매끄럽게 만듭니다.

2. 동물 준비

1. 체중과 관련하여 적절한 케타민과 자일라진 혼합물로 2개월 된 수컷 22-25g C57BL/6N 마우스를 마취합니다: 100 mg/kg + 10 mg/kg ip. 음성 꼬리 핀치 반사로 마취를 확인합니다.
2. 앞쪽 목과 가슴의 털은 제모 크림을 2-3분 동안 바르고 제거합니다. 따뜻한 물과 면포화기로 크림을 제거합니다.
3. 각막이 건조해지는 것을 방지하기 위해 동물의 눈에 안과 연고나 젤을 바르십시오.
4. 동물을 누운 자세로 가열 패드에 놓고 수술 중 모니터링을 수행하며 15분 간격마다 적절한 문서를 보관해야 합니다.
5. 수술 중에 동물이 올바른 위치에 있도록 수술용 종이 테이프를 사용하여 팔다리를 가열 패드에 고정합니다.
6. 알코올과 포비돈-요오드 용액으로 피부를 번갈아 3회 소독합니다.
7. 오염을 방지하기 위해 작업 필드가 노출된 멸균 드레이프를 사용하십시오. 각 마우스와 필요에 따라 새 멸균 장갑을 사용하십시오.

3. 결찰 절차

1. 메스로 목과 가슴의 정중선 위치에 있는 마우스의 피부를 엽니다.
2. 뭉툭한 가위로 결합 조직을 부드럽게 분리하여 갑상선을 머리 쪽으로 당깁니다.
3. 구부러진 바늘로 정중선의 기관에 있는 근육층을 양쪽으로 분리합니다.
4. 뭉툭한 가위를 사용하여 흉골을 두 번째 갈비뼈(약 5mm)까지 자릅니다. 견인기 또는 곡선 집게로 절단부를 엽니다.
5. 구부러진 바늘로 결합 조직을 분리하여 흉선엽을 서로 분리하고 흉벽 아래를 분리하십시오. 횡대동맥궁과 두 개의 경동맥이 이 시점에서 명확하게 보일 것입니다.
6. 구부러진 바늘을 아치 아래에 놓고 구부러진 머리를 바깥쪽으로 밀어 혈관 벽과 반대쪽의 결합 조직 사이를 뚫습니다.
7. 구부러진 바늘을 사용하여 대동맥궁 아래의 6-0 모노필라멘트 봉합사를 당깁니다.
8. 스페이서를 루프에 놓고 이중 매듭으로 봉합사를 제자리에 고정합니다. 스페이서를 부드럽게 제거합니다.
9. 매듭 위치로 성공적인 수축을 확인하고 봉합사의 끝을 자릅니다.
10. 간단한 단속 봉합사 패턴으로 6/0 실크 봉합사를 사용하여 흉벽을 닫습니다. 연속 봉합사 패턴으로 6/0 모노필라멘트 봉합사로 피부를 닫습니다.

4. 수술 후 관리

1. 봉합사 부위에 포비돈 요오드 용액을 바르고 회복 및 수술 후 모니터링을 위해 동물을 미리 데운 케이지에 넣습니다.
2. 동물이 의식을 회복한 후 부프레노르핀(0.05–0.1mg/kg s.c. 12시간마다)을 주사하여 통증을 완화하고 마우스에게 적절한 부드러운 음식을 제공합니다.
3. 완전히 회복된 후 동물을 12시간 라이트/다크 사이클 룸으로 되돌립니다.

결과

그림 1: 1인치, 30게이지 바늘 끝을 구부려 원하는 바늘 고리를 형성하는 과정. (A) 원래 1인치, 30게이지 바늘 끝. (B) 바늘 홀더로 바늘 끝을 잡고 길이를 따라 약 절반 정도로 구부립니다. 필요에 따라 바늘 홀더와 손을 사용하여 바늘을 고리 모양으로 구부려 그림의 오른쪽 상단에 있는 고리를 만듭니다. (C) 구부러진 부분을 제자리에 고정하기 위해 바늘을 폴리우레탄 튜브로 덮습니다. (D) 바늘 홀더를 사용하여 루프 끝을 원하는 모양으로 구부립니다. 이 경우 설명을 위해 두 개의 45–60° 굽힘이 있는 바늘 끝이 표시되었습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1인치 30게이지 바늘	BD, 프랭클린 레이크, NJ 07417, 미국	305128	절차와 그림 1에서와 같이 곡선
27 게이지 바늘	BD, 프랭클린 레이크, NJ 07417, 미국	301629	스페이서를 위해 무뎉고 매끄럽게 만드십시오.
6/0 다필론	B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, 독일	C0933066
6/0 실캄	B. Braun, 34212 Melsungen, Hessen, 독일	C0762067
멸균 장갑	A.R. Medicom, Inc (아시아), 홍콩
코튼 어플리케이터	Mannings, 쿼리 베이, 홍콩		지역 쇼핑 센터
제모 크림	Veet (Hong Kong), Kwun Tong, 카오룽, 홍콩		지역 쇼핑 센터
렉서-베이비 가위	FST, 브리티시 컬럼비아 V7H 0A6, 캐나다	14078-10
곡선형 아이리스 집게	FST, 브리티시 컬럼비아 V7H 0A6, 캐나다	11065-07
Micro Olsen-Hegar 니들 홀더	WPI, Sarasota, FL 34240, 미국	501989
스테레오 현미경	WPI, Sarasota, FL 34240, 미국	PZMIII-학사
GenTeal 아이 젤	Novartis, East Hanover, NJ 07936, 미국		지역 약국
히팅 패드	Kent Scientific Corporation, 토링턴, 코네티컷 06790, 미국	디씨티-20
수술용 테이프	실험동물실험동
케타민과 자일라진	실험동물실험동
베타딘	실험동물실험동
부프레노르핀	실험동물실험동

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