신생아 마우스 난소 격리: 신생아 마우스 모델에서 한 쌍의 난소를 수확하는 수술 절차

초록

출처: et al. Morgan, S. 쥐 난소와 난포의 문화 및 공동 배양. J. Vis. 특급 (2015).

이 비디오에서는 신생아 마우스에서 난소를 분리하는 수술 절차에 대해 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 신생아 난소 박리 및 문화

1. 각 멸균 유리 배아 접시에 1mL의 박리 배지(Leibowitz L15 배지에 3mg/mL BSA를 용해하고 0.2μm 공극, 25mm 직경 필터를 통해 필터 멸균)를 놓습니다.
2. 출생 후 0일에서 5일 사이에 태어난 신생아 쥐 새끼를 도태시키고 참수로 도태시킵니다.
3. 한 쌍의 미세한 해부 겸자를 사용하여 복벽을 덮고 있는 피부를 잡고 피부와 신체 벽을 크게 절개합니다. 절개 부위를 당겨 열어 복부 전체가 드러나도록 합니다. 방광은 일반적으로 이 단계에서 충혈되며 더 쉽게 해부할 수 있도록 구멍을 뚫을 수 있습니다.
4. 워치메이커 집게를 사용하여 내장을 치우십시오. 방광에서 양쪽의 신장까지 자궁 뿔을 따라 올라갑니다. 난소는 자궁 상단의 신장 바로 아래에 위치하며 해부 현미경으로 구름 같은 구조로 나타납니다.
5. 워치메이커 집게로 난소를 부드럽게 잡고 가위를 사용하여 난소와 자궁의 부착을 끊습니다. 한 쌍의 난소를 미리 예열된 해부 배지가 들어 있는 배아 접시로 옮깁니다.
6. 가열된 스테이지(37°C)에서 해부 현미경으로 난소를 미세 절개합니다. 인슐린 바늘을 사용하여 난소만 남을 때까지 윤활낭과 나팔관을 포함한 여분의 물질을 잘라냅니다.
7. 각 난소를 미세하게 그려진 곡선형 유리 피펫을 사용하여 배양 플레이트의 웰로 옮깁니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
라이보비츠 L15	인비트로젠	11415049
α멤	인비트로젠	22571020	완충 중탄산나트륨 (2,200 mg/L)으로 공급
소 혈청 알부민	시그마 알드리치	A9418	해부 매체용
소 혈청 알부민	시그마 알드리치	A3311	배양 배지용
소 혈청 알부민	시그마 알드리치	A2153	유리 파이펫 코팅용
난폭손실시	머크 세로노	고날 F	배치 테스트가 필요한 경우가 많습니다. αMEM에 1IU/10μL의 원액을 만들고 -20°C에서 보관
주사기 필터(25mm, 0.2μm)	그라이너	16532케이	더 큰(>5mL) 부피의 배지를 필터링하기 위한 셀룰로오스 아세테이트 필터.
멸균 튜브	그라이너	187261
24웰 플레이트	그라이너	662160
인슐린 주사 바늘	BD 의료용품	TEL.037-7606	0.33mm(29G) + 1mL
유리 배아 접시	폭스바겐	Tel.: 720-0579	살균한 다음 사용하기 전에 따뜻하게 하십시오.
유리 피펫	피셔 사이언티픽	10209381	사용 전 BSA 코팅
침술 바늘	아큐메딕 주식회사	30mm x 0.25 C형
포르말린 용액, 중성 완충, 10%	시그마 알드리치	HT5014-120mL
Whatman 핵단 멤브레인	캠랩	WN/110414	광택 있는 표면이 위로 폴 리카 네이트, 직경 13mm, 공 공 크기 8.0 μ m를 사용