마우스 모델의 광혈전성 스트로크 모델링: 광혈전증을 유발하기 위해 감광성 염료 투여 후 마우스 두개골을 통한 레이저 조명 기술

초록

출처: Llovera, G. et al. 생쥐의 뇌졸중 모델링: 광혈전증에 의한 국소 피질 병변. J. Vis. 특급 (2021)

이 비디오는 감광성 염료 투여 후 손상되지 않은 두개골의 레이저 조명으로 마우스 모델에서 광혈전 스트로크를 생성하는 절차를 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 동물의 준비

1. 수술 30분 전에 진통제를 주사합니다(카프로펜 4mg/kg 및 부프레노르핀 0.1mg/kg).
2. 마우스의 체중을 기록하여 주입할 Rose Bengal의 용량(10μL/g, 즉 100μg/g)을 조정합니다.
3. 이소플루란 유속이 4%인 유도실에 마우스를 놓고 몸과 진동의 자발적인 움직임이 멈출 때까지
마취합니다.
4. 마우스를 정위 프레임으로 옮기고 코를 마취 마스크에 대고 엎드린 자세로 놓습니다. 동물을 고정하고 이소플루란 농도를 4분 동안 1%로 유지합니다. 그런 다음 이소플루란 농도를 낮추고 2%로 유지합니다.
5. 직장 프로브를 부드럽게 삽입하여 수술 과정 전반에 걸쳐 온도를 모니터링합니다. 마우스 체온을 37°C로 유지하도록 관련 피드백 제어 가열 패드를 설정합니다.
6. 덱스판테놀 안연고를 양쪽 눈에 바르고 소독제로 피부와 주변 털을 닦아줍니다.

2. 광혈전증 모델

1. 2.0-2.5cm의 세로로 절개하고 후퇴하여 두개골을 노출시킵니다. 상처 합병증을 피하기 위해 한 번의 절단으로 두개골 노출을 수행하십시오.
2. 솜으로 골막을 부드럽게 제거하고 관상 봉합사를 확인합니다.
3. 보호 안경을 착용하고 561nm 레이저를 켠 다음 브레그마 +3mm 왼쪽을 표시합니다.
4. 레이저를 끄고 위에서 언급한 표시된 좌표에 직경 4mm의 구멍이 있는 스티커를 부착합니다.
5. 마우스에 Bengal Rose(10μL/g)를 복강내로 주입합니다. 레이저 빔을 두개골에서 4-5cm 떨어진 곳에 놓고 561nm 레이저를 켜고 20분 동안 두개골을 비춥니다.
6. 두개골에 0.9% 식염수 2방울을 떨어뜨려 수분을 보충하고 상처를 봉합한 다음 동물을 37°C의 회복실에 넣어 마취에서 회복합니다. 1시간 후, 생쥐를 온도가 조절되는 방의 우리로 되돌려 놓습니다.
7. 수술 후 3일 동안 12시간마다 진통제를 주사합니다(카프로펜 4mg/kg 및 부프레노르핀 0.1mg/kg).

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
561nm 파장 레이저	솔나	코볼트 HS-03
C57Bl/6J 마우스	찰스 리버	664
콜리미터	쏘랩스	F240APC-A
코톤	NOBA Verbondmitel Danz	974116
에탄올 70%	CLN 케미칼리엔 라보베도르	521005
파인 가위	증권 시세	15000-00
집게	증권 시세	11616-15
난방 담요	FHC DC 온도 조절기	40-90-8D
이소플루란	수도원장	나506
보호 안경	레이저 2000	NIR-ZS2-38
로즈 벵골	시그마 알드리치	AN-198250-5지
식염수	브라운	131321
Stereotactic 프레임	스톨팅	51500유
이소플루란에 대한 마취 시스템	드래거
인산염 완충 식염수 PH : 7.4	Apotheke Innestadt Uni 뮌헨	P32799