섬 이식의 쥐 모델: 췌장도를 문맥에 주입하는 수술 방법 및 수술 후 출혈 예방

초록

출처: Gou, W. et al. 마우스에서 간내 섬 이식 중 주입 후 문맥 출혈 최소화. J. Vis. 특급 (2021년)

이 비디오에서는 췌장섬 세포를 간 문맥에 주입한 다음 출혈을 성공적으로 방지하기 위해 젤 폼을 적용하는 절차를 설명합니다. 수술 후 출혈은 섬 이식 중 높은 사망률의 흔한 원인입니다.

프로토콜

1. 섬 이식

1. 2% 이소플루란으로 전신 마취 상태에서 마우스를 유도하고 유지합니다. 동물의 적절한 마취를 보장하기 위해 페달 반사 신경이 부족한지 확인하십시오.
2. 마우스의 복부 부위에 있는 털을 면도하고 제거합니다.
3. 수술 전 부프레노르핀(0.1mg/kg i.p.)을 1회 투여합니다.
4. 2% 요오드와 75% 알코올을 번갈아 가며 3번 번갈아 가며 수술 부위를 소독합니다.
5. 1-1.5cm의 절개를 생성하기 위해 마이크로 가위로 개복술을 수행합니다.
6. 견인기로 복막강을 엽니다. 아래에 설명된 대로 방법 A 또는 방법 B를 따르십시오.

방법 A: (젤 폼으로 출혈 중지, 그림 1A)

1. 마우스 준비
   1. 절개 부위 주위에 멸균 거즈를 놓습니다.
   2. 겸자를 사용하여 장을 부드럽게 당겨 거즈에 올려 놓습니다.
   3. 문맥의 위치로 정맥을 식별하고 잘 노출시킵니다.
   4. 수술 내내 따뜻한 식염수에 젖은 거즈로 장을 덮습니다.
2. 십이지장 근처의 문맥을 통해 섬 사전 로드된 인슐린 주사기 바늘을 삽입합니다(그림 1B). 이렇게 하려면 구멍(베벨)이 아래를 향하도록 바늘을 잡고 벽을 관통하기 전에 개구부의 각도를 문맥 벽과 평행하게 배치하십시오.
   1. 플런저를 당겨 약간의 혈액(20-50 μL)을 주사기로 끌어당겨 먼저 섬을 혼합합니다.
   2. 플런지를 당기고 미는 것을 반복하면서 문맥에 섬을 천천히 주입합니다.
   3. 주사 부위를 덮기 위해 젤 폼 조각(약 0.5cm x 0.5cm 크기)을 놓습니다.
   4. 문맥에서 바늘을 빼내면서 면 끝으로 젤 폼을 누릅니다.
   5. 약 2분 동안 젤을 계속 눌러 활성 출혈이 없는지 확인합니다.
   6. 젤 폼이 문맥을 잘 덮도록 면 팁을 젤 폼에서 멀리 굴립니다.

방법 B: (뚱뚱한 패드로 출혈 중지, 그림 1C)

1. 문맥을 철저히 노출시킵니다.
   1. 두 개의 면 팁을 사용하여 왼쪽과 오른쪽 모두에서 노출된 문맥을 잡습니다.
   2. 십이지장과 문맥 사이의 지방 조직 패드를 확인합니다.
   3. 문맥에 바늘을 삽입하기 전에 지방 패드를 통해 침투하십시오(그림 1D).
   4. 위의 방법 A에서 설명한 유사한 절차에 따라 섬을 주입합니다.
   5. 면봉으로 지방을 누르면서 바늘을 빼냅니다.
   6. 바늘을 제거한 후 1분 동안 뚱뚱한 패드를 계속 누릅니다.
2. 문맥에서 출혈이 없는 것을 확인한 후 장을 원래 위치로 부드럽게 복강으로 되돌립니다.
3. 봉합하기 전에 복강에 0.5mL의 따뜻한 식염수(36-37°C)를 두십시오.
   메모: 따뜻한 식염수는 수술 후 장의 움직임과 회복을 촉진하고 장 괴사를 예방합니다.
4. 5-0 봉합사로 근육층을 닫습니다.
5. 4-0 봉합사로 피부층을 닫습니다.
6. 마취에서 완전히 회복될 때까지 마우스를 가열 패드 위의 깨끗한 케이지에 넣습니다.
7. 수술 후 12시간마다 진통제(예: 부프레노르핀 0.1mg/kg ip)를 계속 투여하고 48시간 동안 추가 열을 제공합니다.
   참고: 섬 이식 절차는 완료하는 데 약 15-20분이 소요됩니다.

결과

그림 1: 간내 섬 이식 절차의 그림.(A, C). 방법 A와 방법 B에서 사용되는 주요 단계의 개략도. (B, D). 섬은 문맥(C)을 통해 직접 주입하거나 뚱뚱한 팻(D)을 통해 간접적으로 주입했습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
10% 중성 완충 포르말린 v/v	피셔 사이언티픽	23426796
바늘이 있는 1mL 주사기	아아에스	AH01T
20mL 주사기	BD (영어)	301031
25G x 5/8" 피하 주사 바늘	BD (영어)	305122
알코올 준비 패드, 멸균	피셔 사이언티픽	전화: 22-363-750
동물 마취 시스템	베트핍, Inc.	주식회사 901806
부프레노르핀 염산염, 주사	Par 멸균 제품 LLC	표준편차 42023-179-05
에탄올 앱솔루트(200 proof), 분자 생물학 등급	피셔 사이언티픽	BP2818500
극세 마이크로 해부 가위 4" 스트레이트 샤프	Roboz 수술 기구 Co.	RS-5882
Gelfoam (흡수성 젤라틴 스폰지 USP)	Pharmacia & Upjohn 회사	34201
Graefe 집게 4" 매우 섬세한 팁	Roboz 수술 기구 Co.	RS-5136
가열식 패드	아마존	B07HMKMBKM
Hegar-Baumgartner 바늘 홀더 5.25"	Roboz 수술 기구 Co.	RS-7850
27게이지 바늘이 있는 인슐린 주사기	BD (영어)	879588
요오드 준비 패드	피셔 사이언티픽	제19-027048
이소플루란	Piramal 중환자 치료	재질 보기 NDC 66794-017-25
폴리프로필렌 봉합사 4-0	국제 메드벳	MV-8683
폴리프로필렌 봉합사 5-0	국제 메드벳	MV-8661
염화나트륨, 0.9% 정맥 주사 용액	폭스바겐	2B1322Q (영문)
수술용 드레이프, 멸균	국제 메드벳	DR1826

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