마우스에서 온전한 난소 채취: 쥐 모델에서 완전한 난소를 분리하는 수술 절차

초록

출처: Mason, JB et al. 암컷 마우스에서 난소 노화의 수명 및 건강 수명 영향을 조사하기 위한 정orthotopic 난소 이식 절차. J. Vis. 특급 (2018)

이 비디오에서는 마우스 모델에서 온전한 난소를 적출하는 수술 절차에 대해 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 노화된 쥐에 온전한 난소 이식

참고: 이 프로토콜은 동일한 근친 교배의 어린 마우스(60일령)에서 생식 후 암컷(12개월령)으로 난소를 이식하는 동안 사용되는 절차를 설명합니다. 두 암컷 마우스 사이의 난소 이식에도 동일한 절차가 사용됩니다.

1. 예를 들어 케타민, 자일라진 및 아세프로마진(65mg/kg 케타민, 13mg/kg 자일라진 2.0mg/kg, 아세프로마진, 칵테일 용량 - 6.5ml/kg)의 칵테일을 사용하여 복강내(I.P., 27ga 바늘) 주사로 기증자 동물의 무게를 측정하고 마취합니다. 마취가 효과를 발휘할 때까지 동물을 가열된 가정용 케이지에 다시 넣습니다.
2. 마취가 끝나면 집 케이지에서 동물을 꺼내 가열된 종이 타월 위에 올려 놓습니다. 가위(#40 블레이드 선호)를 사용하여 갈비뼈 바로 아래에서 시작하여 원위부로 이동하여 양쪽의 정중선에서 몇 mm 측면으로 털을 제거하고 엎드린 마우스의 양쪽에 약 2-3cm 정사각형의 잘린 '패치'를 준비하여 정중선을 약 1-2cm 덮는 털 스트립을 남깁니다.
3. 잘린 부위를 70% 에탄올로 가볍게 닦고 면봉으로 잘린 부위에 베타딘 용액을 바릅니다.
4. 눈 보호를 위해 항생제 젤을 바르고 수술 후 통증 완화를 위해 동물의 목 측면에 멜록시캠(2.0mg/kg)을 피하(SC, 27ga 바늘)로 투여합니다.
5. 가열된 멸균 수술 필드에 동물을 엎드린 자세로 놓고 70% 에탄올에 적신 2cm x 2cm 면 거즈로 잘린 부분을 닦습니다.
6. 1.0-1.5cm 요추 주위를 절개하고 밑에 있는 근막에서 피부를 뭉툭하게 절개합니다. 근막을 다시 절개합니다. 복강에 도달할 때까지 이 근막 아래를 가능한 한 피상적으로 측면으로 무뚝뚝하게 절개합니다.
7. 절개 부위 (2cm x 2cm 거즈에서 절단) 위에 작은 수술 용 드레이프를 놓고 멸균 식염수로 드레이프를 적십니다.
8. 작은 집게를 사용하여 복강에서 난소를 둘러싸고 있는 지방 조직을 찾아 지방 패드와 난소를 부드럽게 추출하여 젖은 거즈 드레이프에 놓습니다. 난소 지방 패드는 주변 지방 조직보다 '더 하얗게' 나타납니다.
9. 1.5인치 불독 클램프를 지방 패드에 올려놓고(난소 윤활낭을 막지 않도록 주의) 시술 중에 요로를 제자리에 고정합니다.
10. 해부 현미경을 제자리로 옮기고 난소 윤활낭을 명확하게 식별합니다. 두 개의 워치메이커 집게로 윤활낭을 잡고 난소 문짝 맞은편에 있는 난소 윤활낭을 절개하여 난소를 노출시킵니다. 윤활낭의 의도된 접근 영역이 혈관화가 심한 경우 주사기로 에피네프린 한 방울(1:100,000)을 윤활낭 표면에 도포하여 찢어질 때 출혈을 줄입니다.
11. 난소 점액낭에서 난소를 부드럽게 제거하고 출혈을 방지하기 위해 워치메이커 집게로 난소 천장을 조여 난소를 절제합니다.
12. 4°C의 멸균 식염수로 채워진 시계 유리에 기증자 난소를 넣고 느슨하게 덮은 다음 이식 준비가 될 때까지 따로 보관합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
해부 현미경	작동 거리를 조정할 수 있는 모든 해부 내시경.
따뜻한 물 재순환기 및 귀하의 크기, 수술/회복 분야에 적합한 패드.	스트라이커/게이마르	TP700	순환 물 패드는 균일하고 일관된 온도의 작동 및 회수 필드를 생성합니다.
수술 기구 - 생식관에 접근하기 위한 해부 기구			특정 수술 기구의 선택은 외과 의사에 따라 매우 다릅니다
난소 윤활낭을 위한 봉합사 재료	e봉합사	2809G: 9-0 또는 2810G: 10-0 에틸론 블랙 5" BV130-5 테이퍼	10-0 봉합사는 수술 필드에 떨어뜨리면 찾기 어려울 수 있습니다.
흡수성 젤라틴 스펀지	화 이자	겔폼- 화이자 09-0315-08	멸균 상태에서 작은(~2mm) 조각으로 자릅니다.
피부 봉합을 위한 스테이플	벡턴 디킨슨(Becton Dickinson)	MikRon Autoclip 9mm(BD 427631)
눈 연고.	MWI 수의학 공급 회사		Puralube 멸균 안과 연고
마취, 진통제 및 에피네프린용 주사기	MWI 수의학 공급 회사	BD 305536	27g x 3/8in, 피내 베벨 1/2ml
식염수 주사기.	MWI 수의학 공급 회사	BD 309657.	3ml 주사기, Luer-Lok 팁, 27g 바늘
클리퍼/블레이드	안디스	Super AGR+ ™ 무선 탈착식 칼날 클리퍼와 CeramicEdge® #40 칼날.	가는 칼날이 있는 모든 가위.
에탄올	대학 화학 물질 공급		사용을 위해 70%로 희석하십시오.
Betadine 용액	MWI 수의학 공급 회사	3233
2x2 거즈 패드	MWI 수의학 공급 회사	3073	수술 팩으로 오토클레이브
붕규산 유리 구슬	시그마-알드리치 Co	Z273619	sintilation 바이알의 오토클레이브
4-비닐시클로헥센 디폭사이드	시그마 Aldrich Co.	94956

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