카테터 기반 실험제의 정맥 주사: 마우스 모델에서 경정맥을 통해 실험제를 정맥 주사하는 기술

초록

출처: Bornert, A. et al. 쥐 두개골 골수에서 거핵 세포와 프로혈소판의 생체 내 이광자 이미징. J. Vis. 특급 (2021년)

이 비디오에서는 약물 및 추적 염료와 같은 실험제를 생체 내에서 정맥 주사할 수 있는 마우스 모델의 경정맥에 카테터를 이식하는 방법을 설명합니다. 이러한 배열은 다른 시스템에 연결될 때 혈역학 및 혈액 샘플링을 모니터링하는 데에도 사용할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 생쥐 준비 및 경정맥에 카테터 삽입

참고: 여기서는 수컷 또는 암컷, 5-7주 된 mTmG 리포터 마우스(B6.129(Cg) Gt(ROSA)26Sortm4(ACTBtdTomato,-EGFP)Luo10)를 Pf4-cre 마우스와 교배하여 거핵세포 및 혈소판에서 강렬한 녹색 형광 표지를 허용했습니다. 실험을 시작하기 전에 현미경의 가열 챔버를 몇 시간 동안 예열하십시오.

1. 마우스를 이미징 룸으로 운반하고 마취를 진행합니다.
   1. 케타민 (케타민 (100 μg / g) 및 자일라진 (10 μg / g) (5 μL / g) 용액의 복강 내 (ip) 주사로 마우스를 마취합니다 .
      메모: 여기에는 케타민/자일라진의 반복 투여가 사용되며 잘 작동하지만 정기적인 재주입을 위해서는 기록 중단이 필요합니다. 또는 마취 기계를 사용할 수 있는 경우 케타민/자일라진으로 마취 유도를 수행한 후 가스(이소플루란, 공기 및 산소의 혼합물)를 흡입한 상태에서 유지할 수 있습니다.
   2. 깊은 마취에 도달할 때까지 동물을 케이지에 다시 넣습니다. 모든 후속 조작을 위해 37°C로 예열된 가열된 플레이트에 마우스를 놓습니다.
      메모: 동물이 깊은 마취에 도달하는 동안 현미경과 모든 장비를 켜고 수술이 완료되면 실험을 시작하는 데 필요한 다양한 매개변수를 설정합니다. 여기서 절차는 3 시간 만 지속되며 터미널입니다. 실험 후 쥐는 깨어나지 않고 안락사됩니다. 따라서 피부와 기구에 대한 에탄올 소독으로 충분합니다. 그러나 기관 지침에 따라 또는 절차가 더 오래 지속될 경우 베타딘/포비돈 및 알코올을 3회 번갈아 가며 스크럽하는 것과 같은 보다 완전한 소독 방법을 사용해야 합니다.

2. 경정맥에 카테터를 설치합니다.

참고: 수술 중 미생물 오염을 최대한 피하는 것이 중요합니다. 수술을 진행하기 전에 70% 에탄올(EtOH)로 피부를 정성스럽게 소독하십시오. 항상 멸균된 가위와 핀셋을 사용하고 정기적으로 70% EtOH로 헹굽니다. 깨끗한 장소에서 작업하고 안면 마스크를 착용하십시오. 플라스틱 튜브 내부의 바늘로 구성된 22G의 "over-the-needle" 카테터가 정맥 주사에 사용됩니다(재료 표 참조).

1. 마우스를 등에 대고 수술 테이프로 앞쪽 다리를 고정하여 목을 늘립니다(그림 1A). 70% 에탄올로 목을 소독하십시오.
   메모: 편의상 수술 전에 목을 깎을 수 있습니다. 절차가 더 오래 지속되면 적절한 무균 기술을 위해 조심스럽게 면도를 수행해야 합니다.
2. 멸균 가위를 사용하여 오른쪽 또는 왼쪽 경정맥을 0.7-1cm 절개합니다. 인접한 결합 조직을 늘려 외부 경정맥과 가슴 근육 상단을 노출시킵니다(그림 1A).
3. 카테터에 따뜻하고 멸균된 생리식염수를 채웁니다. 가슴 근육을 관통 한 후 카테터를 정맥에 삽입합니다 (그림 1B).
   메모: 카테터 내부에 기포가 생기지 않도록 주의하십시오. 근육이 압박점을 형성하므로 출혈을 방지하기 위해 근육을 통해 카테터를 삽입하는 것이 중요합니다. Itgb3-/- 마우스와 같이 지혈 결함이 있는 마우스도 이 방법으로 카테터 삽입 시 출혈이 발생하지 않습니다.
4. 바늘을 부드럽게 제거하고 필요한 경우 카테터를 정맥 깊숙이 조심스럽게 이동합니다. 주사기를 연결하고 수술용 접착제 한 방울을 추가하여 카테터를 안정화합니다(재료 표).
   메모: 꼬리 정맥 내부에 카테터를 삽입하는 것은 가능하지만 정맥의 구경이 더 작기 때문에 약간의 연습이 필요합니다. 이것은 꼬리 정맥이 거의 보이지 않는 검은 털을 가진 마우스를 사용할 때 특히 어렵습니다. 구경이 더 크기 때문에 카테터를 경정맥 내부에 배치하면 더 많은 부피나 반복적인 치료를 보다 안정적으로 주입할 수 있습니다. 주사기는 처음에 따뜻한 식염수로 채워지며 약물 용액을 주입하기 전에 데드 볼륨을 주입하는 것을 잊지 마십시오.
5. 마우스를 엎드린 위치로 조심스럽게 되돌립니다(그림 1C). 건조를 방지하기 위해 눈에 젤(Table of Materials)을 바르십시오.

결과

그림 1: 카테터 삽입.(A) 경정맥과 가슴 근육 상부를 노출시키기 위해 절개합니다. (B) 식염수가 채워진 카테터는 근육을 통과하여 경정맥에 삽입되어 압박점을 만듭니다. (C) 카테터가 잘 배치된 상태에서 마우스가 복부 표면이 아래쪽으로 향하도록 마우스를 조심스럽게 돌립니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
히스토아크릴릴 5 x 0, 5 mL	브라운	1050052	수술용 접착제의 주사 가능한 용액
이말겐/케타민 1000 fl/10 mL	보링	3661103003199.00	눈 보호
롬푼 자일라진 2% fl/25 mL	바이엘	4007221032311.00
Surflo IV 카테터 - 블루 22 g	테루모	SR-OX2225C1