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동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.
1. 수술 및 두개골 링 설치
참고: 마우스 설치에 대한 전체 지원은 블록과 플레이트, 마우스 머리를 고정하는 링, 링을 블록에 고정하는 나사의 4부분으로 구성됩니다(그림 1A). 지원의 모든 요소는 3D 프린팅을 통해 i.materialise.com 로부터 얻었습니다. 플레이트는 아크릴로니트릴 부타디엔 스티렌(ABS) 폴리머, 스테인리스강 블록 및 나사, 고급 스테인리스강(세밀한 스테인리스강) 링으로 만들어집니다(3D 프린팅 파일의 치수 및 재료는 그림 2 참조). 블록은 나사로 고정되거나 접착되어 지지대에 영구적으로 고정됩니다. 링이 마우스 두개골에 고정되면 블록 홀더에 나사로 고정해야 합니다(그림 1A).
- 소독을 위해 70% 에탄올을 적신 종이 타월로 두피의 모발을 적십니다. 젖은 종이 타월로 느슨한 머리카락을 모두 제거하십시오.
메모: 편의상 수술 전에 두피를 면도할 수 있습니다.
- 멸균 가위와 핀셋을 사용하여 정중선과 귀 사이에 T를 형성하여 칼바륨을 노출시켜 두피를 절개합니다.
메모: 고리는 정면 뼈와 두정골 뼈와 겹치도록 배치됩니다(그림 1B).
- 멸균 핀셋을 사용하여 두개골을 노출시킵니다. 가위와 핀셋으로 골막을 조심스럽게 제거합니다. 생리식염수를 적신 멸균 면봉을 사용하여 이미징을 변경할 수 있는 모든 골막과 부스러기 또는 머리카락을 제거합니다.
메모: 염증 반응을 제한하려면 뼈가 손상되지 않도록 각별히 주의해야 한다.
- 식염수로 헹구어 핏자국을 제거하고 마른 면봉으로 뼈를 빠르게 건조시킵니다. 글루 젤을 링에 바르고 노출된 뼈에 놓고 링이 두개골에 단단히 부착되도록 몇 초 동안 유지합니다.
메모: 바람직하지 않은 자가형광을 유발할 수 있으므로 관찰 필드에 접착제를 넣어서는 안 됩니다.
- 생리식염수에 적신 면봉으로 두개골을 가볍게 적십니다.
- 실리콘 덴탈 페이스트는 파란색과 노란색 성분을 1:1로 조심스럽게 혼합하여 준비합니다. 이미징 중 누출을 방지하기 위해 밀봉을 위해 링 전체에 치과 페이스트를 바르십시오. 링에 들어갔을 수 있는 치과용 페이스트나 접착제를 조심스럽게 제거합니다.
- 링에 식염수를 채우고 누출이 있는지 확인하십시오.
메모: 식염수는 현미경 대물렌즈의 침지 매체 역할을 합니다. 출혈은 지혈 관련 결함이 있는 마우스를 사용할 때 더 중요할 수 있습니다. 혈액이 링에 들어가는 것을 방지하는 것이 중요하며, 이는 추가 이미징을 흐리게 할 수 있으므로 반드시 필요합니다.
- 마우스를 지지대에 놓고 블록 홀더에 링을 조입니다(그림 1C). 접힌 찜질을 동물의 머리 아래에 놓아 머리를 들어 올리고 두개골에서 고리가 분리되는 것을 방지합니다.
메모: 머리는 직접 고정되어 호흡으로 인한 이미지 움직임을 방지합니다.
- 가열된 현미경 챔버에 지지대와 마우스 어셈블리를 배치합니다(그림 1D).
참고: 삽입된 카테터가 어떤 경우에도 빠지지 않도록 주의하십시오.
