마우스 모델의 췌장 생체 내 이미징 창 설치: 쥐 췌장 미세 구조의 타임랩스 생체 내 이미징을 위한 통합 췌장 이미징 창

초록

출처: Park, I. et. al. 췌장 생체 내 이미징 창을 가진 쥐 모델에서 췌장의 안정화된 종단 생체 내 세포 수준 시각화. J. Vis. 특급 (2021)

이 비디오는 췌장 미세 구조의 종방향 타임 랩스 고해상도 이미징을 위해 췌장 이미징 창을 이식하여 췌장을 장에서 분리하는 절차를 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 수술

1. 멸균 수술 플랫폼을 준비하고 70% 에탄올로 표면을 멸균합니다.|
   메모: 종적 이미징 세션의 경우 무균 기술이 필수적입니다.
2. 틸레타민/졸라제팜(30mg/kg) 및 자일라진(10mg/kg)의 혼합물로 마우스를 마취합니다.
   메모: 케타민 대신 틸레타민/졸라제팜을 사용하는 것이 좋으며, 이는 고혈당증의 부작용 때문에 권장됩니다. 실험의 목적에 맞는 최적의 마취를 선택해야 합니다.
3. 항상열 조절 발열 패드가 있는 직장 프로브를 사용하여 체온을 모니터링합니다.
4. 마우스의 왼쪽 측면을 면도하고 알코올과 요오드 기반 스크럽을 번갈아 가며 3회 바릅니다.
   메모: 제모 크림을 사용하는 경우 화학적 화상을 방지하기 위해 1분 이상 방치하지 마십시오.
5. 마우스의 왼쪽 측면을 1.5cm 절개하여 피부와 근육을 절
개합니다.
6. 절개 가장자리에 검은색 또는 나일론 4-0 봉합사를 사용하여 지갑 끈 봉합을 수행합니다.
7. 절개 부위에 마이크로 견인기를 사용하여 비장을 부드럽게 노출시킵니다.
8. 고리 집게로 비장을 조심스럽게 모으고 췌장을 확인합니다.
9. 창문을 쥐의 측면에 놓고 창문의 열린 공간을 통해 비장과 췌장을 통과시킵니다. 췌장의 조작은 출혈이나 췌장염을 유발할 수 있으므로 매우 부드럽게 이루어져야 합니다.
   메모: 복강에 있는 장에서 췌장을 격리하기 위해 췌장 생체 내 이미징 창을 맞춤 설계합니다(그림 1A, B).
10. 이미징 창의 플레이트에 췌장을 부드럽게 놓습니다.비장은 창의 열린 공간에 배치됩니다.
11. 이미징 창의 가장자리에 N-butyl cyanoacrylate 접착제 방울을 바릅니다.
    1. 도포되는 접착제의 양을 최소화하려면 도포에 31G 카테터 바늘을 사용하십시오. 방울의 양이 많으면 조직이 의도하지 않게 창이나 커버 유리에 달라붙습니다.
12. 12mm 원형 커버 유리를 이미징 창의 여백에 부드럽게 적용합니다.
13. 봉합사 루프를 창의 측면 홈에 맞게 당겨 세 번 묶습니다.
14. 이 쥐가 깨어 있을 때 꽉 꿰매는 중단을 방지하기 위해 매듭의 최대 근위 부위를 자릅니다.
15. 생쥐가 마취(2-3시간)에서 회복하고 통증 완화를 위해 케토프로펜(5mg/kg, 동물의 목 또는 엉덩이 기저부의 느슨한 피부에 피하주사)을 주사합니다. 12시간마다 통증 징후를 재평가하고 1-3일 동안 24시간마다 케토프로펜을 고려해야 합니다.
    메모: 진통제는 포도당에 대한 반응으로 인슐린 분비에 영향을 미칩니다. 진통제의 선택과 시기는 실험 목적에 맞게 개별화되어야 합니다.
16. 창문이 케이지에 닿지 않도록 충분한 침구가 있는 케이지에 마우스를 수용하십시오. 창문 수술 없이 쥐가 있는 집을 피하십시오.

결과

그림 1. 췌장 생체 내 이미징 창의 디자인 및 사진. (A) 췌장 생체 내 이미징 창의 3D 및 단면도. (B) 췌장 영상 창의 전방 및 후방 사진.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
커버 안경 원형	마리엔펠트	111520	췌장 이미징 창용 커버 유리
아이리스 가위	(주)정도바이오 & 플랜트 (JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	에스-1107-10	이 제품은 타사 제품으로 교체할 수 있습니다.
록타이트 401	헨켈	401	N-부틸 시아노아크릴레이트 접착제
마이크로 니들 홀더	(주)정도바이오 & 플랜트 (JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	H-1126-10	이 제품은 타사 제품으로 교체할 수 있습니다.
마이크로 리트랙터	(주)정도바이오 & 플랜트 (JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	17004-03	이 제품은 타사 제품으로 교체할 수 있습니다.
마이크로핀치	(주)정도바이오 & 플랜트 (JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	F-1034	이 제품은 타사 제품으로 교체할 수 있습니다.
나일론 4-0	에일리	NB434	Non-Absorbable 봉합사
옴니칸 N 100 30G	B 브라운	FT9172220S	혈관 카테터의 경우 바늘 부분만 사용하십시오
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링 집게	(주)정도바이오 & 플랜트 (JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	F-1090-3	이 제품은 타사 제품으로 교체할 수 있습니다.
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