Antegrade Perfusion Model: 고립된 마우스 심장을 관류하는 생체 외 기술

초록

출처: Omatsu-Kanbe, M. et al., 생쥐에서 심근세포 분리를 위한 사전 관류 방법. J. Vis. 특급 (2021).

이 비디오는 고립된 쥐 심장의 전단계 관류 기술에 대해 설명하며, 그 동안 관류액이 좌심실을 통해 주입되고 최종적으로 전체 심근을 관류합니다. 이 방법은 쥐 모델에서 심근세포를 분리하고 추가 다운스트림 응용 프로그램을 위해 탈세포화된 심장을 생성하는 데 사용할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 마우스 심장의 사전 관류

참고: 심장을 빨아들이는 데 사용되는 플라스틱 이송 피펫은 부드러워야 하며 끝을 향해 날카롭게 가늘어지지 않아야 합니다. 톱니가 있는 작은 혈관 클램프를 선택하십시오. 권장 기기는 재료 표에 나열되어 있습니다.

1. 마우스 심장 절제 및 대동맥 조임
   메모: 성체 마우스(>8주령)는 펜토바르비탈나트륨(>300mg/kg, 복강내[ip] 주사)과 헤파린(8000단위/kg)을 과다 투여하여 안락사시켜야 합니다.
   1. 빨아서 쥐의 심장을 빠르게 절제하십시오.
      1. 흉강을 빠르게 열어 심장을 노출시킵니다. 끝이 노출된 심장과 거의 같거나 약간 작은 플라스틱 전사 피펫을 자릅니다(일반적으로 0.5mL 표시에서 팁 방향으로 약 1cm 떨어진 부위이지만 심장 크기에 따라 다름).
      2. 심장을 피펫으로 빨아들이고, 가위를 넣을 수 있는 충분한 ....

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
확장 튜브	Top, 일본	1-50	주사기와 주사 바늘로 연결하여 사전 관류를 제공합니다.
히터 매트	Natsume Seisakusho, 일본	KN-475-3-40	관류 플레이트를 데우는 장비.
주입 펌프	TERUMO, 일본	테-311	사전 관류를 위한 주입 주사기 펌프.
주사 바늘 (27 게이지)	TERUMO, 일본	NN-2719S	좌심실에 삽입하기 위한 바늘.
인슐린(소 췌장에서 추출)	Sigma-Aldrich, 미국	I5500	0.1M HCl에 용해합니다.
플라스틱 주사기(20mL)	TERUMO, 일본	친위대-20ES	CIB-EGTA 주입에 사용합니다.
혈관 클램프	Karl Hammacher GmbH, 독일	HSE 004-35	대동맥을 클램핑하는 데 사용되는 작은 직선 혈관 클램프.
다른 모든 시약	Nacalai Tesque, 일본

개 (영문)