마우스 서혜부 림프절 부피 분석: 마우스 모델에서 서혜부 림프절의 부피를 결정하기 위한 초고주파 초음파 이미징 기법

초록

출처: Vitiello, M. et. al., 흑색종의 Braf/PTEN 유전자 조작 마우스 모델에서 초고주파 초음파 영상에 의한 림프절 부피 분석. J. Vis. 특급 (2021)

이 비디오에서는 초고주파 초음파 이미징을 사용하여 마우스 모델의 서혜부 림프절을 이미지화하는 기술을 보여줍니다. 이 비침습적 이미징 기술을 통해 시간 경과에 따른 동물의 림프절 용적 변화를 모니터링할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 이미징 절차

1. 가스 마취를 위해 마우스를 유도실에 넣고 동물이 완전히 마취될 때까지 순수한 산소에 3% 이소플루란을 공급합니다. 발 꼬집음에 대한 반응 부족으로 마취의 깊이를 확인합니다.
2. 동물을 UHFUS 이미징 스테이션의 구성 부분인 가열된 보드로 옮겨 동물을 앙와위 자세로 유지합니다. 바셀린으로 윤활된 직장 프로브를 사용하여 체온을 측정합니다. 마우스의 체온을 생리적 범위(36 ± 1°C)로 유지하기 위해 보드 온도를 조정합니다.
3. 마취 중 건조를 방지하기 위해 수의사 연고로 마우스의 눈을 적십니다. 마우스의 코 마스크를 통해 마약 가스(순수 산소 중 1.5% 이소플루란)를 공급합니다. 올바른 마취 깊이를 유지하기 위해 이소플루란의 비율을 조정합니다.
4. 앞발과 뒷발을 전도성 페이스트로 코팅하고 보드에 내장된 ECG 플레이트 전극에 테이프로 붙입니다. 생리학적 매개변수(심박수, 호흡 신호 및 심부 체온)가 올바르게 획득되고 표시되는지 확인하십시오.
5. 제모제를 바르고 서혜부 양쪽 부위의 털을 제거하고 음향 결합 매체로 코팅합니다.
6. UHFUS 선형 프로브(40MHz 중심 주파수)를 UHFUS 이미징 스테이션에 내장된 특수 3D 모터에 고정하여 프로브의 자동화된 단계적 이동을 가능하게 합니다.
7. 초음파 프로브의 위치를 적절하게 배치하고 조정하여 서혜부 림프절(왼쪽/오른쪽)의 단축 이미지를 얻고 관심 영역을 초점 영역에 배치합니다.
8. 앞에서 설명한 대로 서혜부 림프절의 전체 부피를 2D B-모드 이미지의 시퀀스로 스캔합니다. 마이크로미터 규모의 스텝 크기로 트랜스듀서의 선형 이동을 통해 림프절의 여러 레벨에서 이미지를 획득하여 자동으로 호흡 및 심장 개폐 시네 루프 측면에서 3D 데이터를 생성합니다.
9. 다음 매개변수로 이미지 기록을 설정하십시오: 2 및 5mm 범위의 스캔 거리(림프절 크기에 따라 다름); 단계 크기 44μm, 46-114 스캔 단계/림프절 절편의 결과 및 동물당 1-3분의 획득 시간. 추가 오프라인 분석을 위해 획득한 이미지를 원시 형식(DICOM)으로 디지털 방식으로 저장합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
나6. Cg-Braftm1Mmcm Ptentm1Hwu Tg(Tyr-cre/ERT2)13Bos/BosJ(Braf/Pten) 마우스	잭슨 연구소	13590
블루겔	수프트 이알리아		점안액 젤
IsoFlo (이소 플로란)	조에티스		기체 마취용 액체
시그마 젤	파커		전극 젤
천음속 젤 클리어	텔릭 SAU		초음파 젤
비트	레킷벤키저 IT		탈모 크림
소형 이중 마취 시스템	후지 필름, 비주얼 소닉스 Inc.		콧방울과 유도 챔버가 장착된 이소플루란 기반 마취 시스템
MX550S	후지 필름, 비주얼 소닉스 Inc.		UHFUS 선형 프로브
베보 3100	후지 필름, 비주얼 소닉스 Inc.		UHFUS 시스템
Vevo 이미징 스테이션	후지 필름, 비주얼 소닉스 Inc.		UHFUS 이미징 스테이션 및 가열된 보드가 부여된 Advancing Physiological Monitoring Unit
베보 랩	후지 필름, 비주얼 소닉스 Inc.		초음파 이미지 후처리를 위한 소프트웨어 플랫폼