쥐에서 망막 컵 추출: 마우스 눈에서 온전한 망막 컵을 얻기 위한 수술 절차

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초록

이 비디오는 바깥쪽을 덮는 층이 없는 망막 컵을 쥐의 안구에서 분리하는 프로토콜에 대해 설명합니다. 추출된 망막 조직은 망막 세포에서 발생하는 다양한 대사 경로를 연구하는 데 도움이 될 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 망막컵 박리

안락사에 대한 제도적 지침에 따라 CO₂질식으로 쥐를 안락사시키십시오.
메모: 안락사에 필요한 시간보다 더 오래 동물을 CO₂챔버에 두지 마십시오.
눈을 적출하고 페트리 접시에 담긴 얼음처럼 오래된 1x PBS 완충액에 넣은 다음 해부 현미경 아래에 놓습니다.
안구 바깥쪽에 붙어있는 여분의 직근을 마이크로 가위로 잘라 조심스럽게 제거하고 시신경을 잘라냅니다.
30G 바늘을 사용하여 각막(변연계)의 가장자리에 구멍을 뚫습니다. 이 구멍은 마이크로가위의 삽입 부위 역할을 합니다. 그런 다음 미세한 절개 마이크로 가위를 사용하여 각막 가장자리를 따라 원을 그리며 안구 컵과 분리합니다.
날카로운 절개 집게를 사용하여 안구컵에서 각막, 수정체 및 유리체액을 제거합니다.
미세 절개 마이크로 가위를 사용하여 눈컵 가장자리의 공막층을 여러 번 작게 자릅니다. 망막층을 절단하지 마십시오. 두 개의 날카로운 절개 겸자를 사용하여 절단된 부분의 양쪽에 있는 공막 조직을 잡고 공막층을 매우 조심스럽게 당겨 신경 망막에서 제거합니다. 모든 공막이 제거되고 온전한 망막 컵을 얻을 때까지 눈컵 주변에서 이 작업을 반복합니다.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름	회사	카탈로그 번호	댓글
1X PBS	써모 피셔	14190-144
30게이지 바늘	BD 프리시전 글라이드	305106
생검 펀처, 1mm	인테그라 밀텍스	33-31AA
CO2 질식 챔버
해부 겸자 - Dumont # 5	정밀 과학 도구	11251-10	스트라이트 팁
해부 겸자 - Dumont # 7	정밀 과학 도구	11274-20	곡선형 팁
해부 현미경
그레이프 겸자	정밀 과학 도구	11051-10	곡선형, 톱니 모양 팁
마이크로 가위	정밀 과학 도구	15004-08	곡선형 팁

년 년 년 년 년

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