정점 절제 신생아 마우스 모델: 신생아 마우스 심장의 재생 가능성을 연구하기 위해 심실 정점을 절단하는 수술 절차

초록

출처: Li, Y. et al. 신생아 마우스 심장 대식세포를 성인 마우스에 이식. J. Vis. 특급 (2021).

이 비디오에서는 신생아 마우스 심장의 좌심실 정점을 외과적으로 제거하는 절차를 보여줍니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 신생아 1일 된 Cx3cr1 ^GFP/+ 마우스의 정점 절제 수술 (C57BL/6 배경)

1. 마취
   1. 새장에서 모든 쥐 강아지를 꺼내 깨끗하고 마른 상자에 넣으십시오.
   2. 각 마우스를 약 2-3분 동안 얼음에 넣습니다. 동상을 방지하기 위해 얼음과 새끼 쥐 사이에 라텍스나 거즈와 같은 얇은 장벽이 있는지 확인하십시오.
   3. 창백한 피부, 팔다리 움직임 부족, 페달 반사 부족 등의 징후를 관찰하여 충분한 마취를 확인하십시오.
2. 개흉술
   1. 마취 유지를 돕기 위해 청동 작동 플랫폼을 -20°C에서 밤새 예냉합니다.
   2. 마취된 쥐를 아이스박스에서 꺼내 청동 수술대에 올려놓는다. 의료용 접착 테이프를 사용하여 작동 플랫폼에 누운 자세로 마우스를 고정합니다.
   3. 마우스가 있는 작동 플랫폼을 입체경 아래에 놓습니다.
   4. 베타딘과 70% 알코올을 적신 준비 패드를 사용하거나 기관 정책에 따라 마우스 가슴을 소독합니다.
   5. 흉강의 네 번째 늑간 부위를 1cm 절개하여 피부를 절개한 다음 심장에 접근할 때까지 미세 수술 가위를 사용하여 늑간 근육을 분리합니다.
   6. 두 개의 집게를 사용하여 심장이 기계적 손상 없이 가슴 밖으로 나올 때까지 가슴과 복부를 번갈아 누릅니다.
   7. 작은 절개 부위의 아래와 위에 있는 갈비뼈를 심장을 고정하기 위한 자연스러운 고정으로 설정하십시오.
3. 심실 정점 절제술
   1. 좌심실의 정점을 찾습니다. 입체경 아래에서 홍채 절제술 가위를 사용하여 1mm 직경의 심실 정점 조직을 절단합니다.
   2. 좌심실이 노출되어 있고 진물이 나오기 시작하는지 확인합니다.
   3. 면봉을 사용하여 심장을 흉강으로 부드럽게 누릅니다.
   4. 근육, 갈비뼈, 피부를 8-0으로 봉합합니다. 프롤렌 봉합사.
   5. 수술 후 마우스를 철저히 청소하십시오.
4. 수술 후 관리
   1. 작동 플랫폼에서 마우스를 37°C 가열 담요로 옮겨 작업 직후 몸을 예열하십시오.
   2. 다음과 같은 징후를 관찰하여 마우스의 역생물 상태를 확인합니다: 자발적 호흡 회복, 피부색이 창백함에서 분홍색으로 변화, 팔다리의 움직임.
   3. 수술한 쥐는 회복되면 어미에게 다시 데려갑니다.
   4. 필요한 경우 작동된 마우스를 어미의 둥지 재료와 섞습니다.
      메모: 생후 1일 된 새끼를 모두 어미에게서 한 번에 모두 제거한 다음 모든 새끼를 회복한 후 한 번에 모두 돌려주는 것이 중요합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
신생아 심장 해리 키트	Miltenyi Bio Tech, Teterow, 독일	130-098-373