요로 감염 생성 모델: 요로 감염 모델을 개발하기 위해 마우스에 요로병원성 박테리아를 투여하는 기술

초록

출처: Luyts, N. et al., Bioluminescence Imaging을 사용한 생쥐의 요로 감염 및 치료에 대한 종단 추적 관찰. J. Vis. 특급. (2021).

이 비디오에서는 생쥐에서 요로 감염 모델을 생성하기 위해 요로병원성 박테리아의 방광 내 투여 기술에 대해 설명합니다. 이 모델은 비뇨기계 내 요로병원성 세균 감염의 확산과 요로감염 감수성을 결정하는 메커니즘을 이해하는 데 사용할 수 있습니다.

프로토콜

1. 동물의 접종

1. 동물의 준비
   1. 연구 질문과 knock-out 라인의 가용성, 실험 세부 사항 및 UTI 감수성의 차이에 따라 원하는 마우스 균주를 선택합니다. 경요도 카테터 삽입은 암컷 마우스에서 더 쉽다는 점을 명심하십시오. 8주 미만의 동물은 면역학적으로 미성숙하므로 사용하지 마십시오. 여기에서는 12주 된 암컷 C57Bl/6J 마우스를 사용했습니다.
   2. 동물을 미리 주문하고 이상적으로는 7일 동안 적응시키십시오. 동물을 개별적으로 환기가 되는 우리에 수용하는 그룹은 표준 12시간 명암/폐 조건에서 동물을 수용합니다.
   3. 신호 손실을 제한하기 위해 동물의 복부 부위를 면도하십시오. 제모 크림은 동물의 피부를 빨리 태울 수 있으므로 사용하지 마십시오. 주로 사용하지 않는 손으로 목덜미와 뒷다리를 단단히 잡고 면도하는 동안 주로 사용하는 손으로 동물을 제지합니다. 또는 이소플루란 마취 하에 면도하십시오.
      메모: 동물은 이미징 2일 전에 면도를 했는데, 동물이 면도한 부위를 더욱 손질할 것이라는 점을 고려했습니다.
   4. 실험 내내 물과 표준 식품을 자유롭게 제공하십시오. 그러나 점안 중 방광 부피를 최소화하기 위해 점안 2시간 전에 동물에게 물을 주지 마십시오.
   5. 100μL 주사기에 멸균 24G 혈관카테터 팁을 장착하고 주사기에 박테리아 용액을 채웁니다.
2. 동물의 주입
   1. 동물을 유도실에 넣고 순수한 산소를 운반 가스로 사용하는 이소플루란을 흡입하여 마취합니다(유도 3%, 유지 1.5%).
   2. 한 마리의 동물을 누운 자세로 작업 표면에 놓고 점안하는 동안 콧방울을 사용하여 안정적인 이소플루란 마취를 유지합니다. 눈 연고를 바릅니다.
   3. 잔여 소변을 부드럽게 압박하고 치골상 부위를 원을 그리며 움직여 배출합니다. 점안하기 전에 70% 에탄올로 하복부를 청소하십시오.
   4. 카테터 끝을 생리식염수로 윤활합니다. 주로 사용하지 않는 손의 검지를 복부에 대고 부드럽게 위로 밉니다. 90° 각도(수직)로 요도의 카테터 삽입을 시작하고 저항이 발생하면 더 삽입하기 전에(0.5cm) 수평으로 기울입니다.
      메모: 카테터를 세게 밀면 요도에 해를 끼칠 수 있으므로 절대 무리하게 밀지 마십시오. 부드럽게 돌리는 동작은 카테터 삽입에 도움이 될 수 있습니다. 반면에, 저항이 부족하다는 것은 일반적으로 질에 잘못 삽입되었음을 나타냅니다.
   5. 50μL의 박테리아 접종물(2 x 10,⁷ CFU)을 느리게(5μL/s) 주입합니다.
      메모: 더 많은 양이나 더 빠른 점안은 신장으로 역류를 유발할 수 있습니다. 기술을 연습하는 동안 파란색 잉크를 사용하여 역류를 평가할 수 있습니다.
   6. 점안 후 주사기와 카테터를 몇 초 더 제자리에 두었다가 누출을 방지하기 위해 천천히 수축시킵니다. 다량의 누출 또는 피 묻은 고기와 같은 불규칙성을 기록하고 필요한 경우 동물을 제외합니다.
   7. 이미징 챔버의 노즈콘에서 동물을 누운 자세로 놓고 나머지 모든 동물에 대해 이전 단계 1.1.1-1.1.6을 반복합니다. 실험군당 하나의 카테터를 사용합니다. 마취를 계속하고 첫 번째 동물과 마지막 동물 사이의 시간을 최소화합니다.
   8. 필요한 경우 이미징 전이나 후에 항생제 또는 실험 약물을 투여합니다(3단계). 예를 들어, 엔로플록사신을 투여하려면 40μL의 엔로플록사신(100mg/mL) 용액을 3.96mL의 생리식염수에 첨가하여 1/100 희석을 얻습니다. 오전 9시와 오후 5시에 100μL/10g을 피하주사하여 3일 동안 하루 2회 10mg/kg의 엔로플록사신을 투여합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
에스큘라프 ISIS	에스큘랍	GT421	헤어 트리머, GT608 캡 포함
마취 기화기	하버드 기구 제한	해당 사항 없음	https://www.harvardapparatus.com/ harvard-apparatus-anestheticvaporizers.html
BD Insyte 오토가드 24 GA	BD (영어)	382912	노란색 혈관 카테터, 점안을 위해 멸균 플라스틱 팁을 사용하십시오.
C57Bl/6J 마우스	잔비에	해당 사항 없음
Dulbecco의 인산염 완충 식염수, Gibco	써모피셔 사이언티픽	참조: 14040-083
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