마우스 모델에서 대장내시경 유도 핀치 생검: 마우스 결장에서 조직 샘플을 시각화하고 추출하는 기술

초록

출처: Montrose, D. C., et al. 마우스에서 대장내시경 유도 핀치 생검 수행 및 후속 조직 변화 평가. J. Vis. 특급 (2021)

이 비디오는 마우스에서 대장내시경 유도 핀치 생검을 수행하기 위한 프로토콜을 보여줍니다. 이 기술은 결장 내강을 시각적으로 분석하고 자세한 연구를 위해 조직 샘플을 수집하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 대장내시경 검사 및 상처 유도

1. 먼저 1.9mm 경질 내시경을 외피에 삽입하여 내시경의 구성 요소를 사전 조립합니다(그림 1A-B). 제공된 튜브를 사용하여 공기 펌프(결장 흡입을 제공하기 위해)를 작업 채널 옆의 칼집 왼쪽에 있는 가스 밸브에 연결합니다(그림 1C).
   메모: 여기에 설명된 렌즈는 0°이지만 30° 렌즈도 이를 위해 사용할 수 있습니다.
2. 작업 채널이 열린 위치에 있는지 확인하고 작업 채널을 통해 3개의 Fr 생검 겸자를 삽입하고 덮개 끝까지 전진시킵니다(덮개에서 튀어나오지 않도록 확인하면서)(그림 1C). 조립된 내시경을 제조업체의 지침에 따라 광원 및 비디오 이미징 장치에 부착합니다.
3. 유도 챔버에서 산소와 함께 5% 이소플루란으로 마우스를 마취합니다. 그런 다음 마우스를 복부 쪽에 난방 시스템(저체온증 예방을 위해)이 포함된 내시경 병기 결정 플랫폼으로 이동하고 산소가 포함된 2% 이소플루란이 있는 노즈 콘을 사용하여 마취 상태를 유지합니다. 마취 상태에서 건조함을 방지하기 위해 수의사 연고를 눈에 바르십시오. 반사 검사를 위해 뒷발을 부드럽게 꼬집어 마우스가 완전히 마취되었는지 확인합니다.
   메모: 모든 균주 또는 성별의 마우스를이 기술과 함께 사용할 수 있습니다. 그러나, 생쥐는 생후 8주 이상이어서 시술을 하기에 충분히 큰 것이 바람직하다.
   1. 마취 상태에서 건조함을 방지하기 위해 수의사 연고를 눈에 바르십시오.
   2. 반사 작용을 테스트하기 위해 뒷발을 부드럽게 꼬집어 마우스가 완전히 마취되었는지 확인합니다.
4. 부착된 쥐 개배지 바늘과 함께 3mL 주사기에 실온 인산염 완충 식염수(PBS)를 채웁니다. 마우스의 항문에 바늘을 약 1cm 정도 삽입하고 PBS를 부드럽게 주입하여 배설물을 제거합니다. 주입된 PBS와 함께 여러 배설물 알갱이가 마우스에서 나와야 합니다.
   메모: 과도한 양의 PBS를 주입하면 내강에 거품이 형성되어 내강을 보는 데 방해가 될 수 있습니다.
5. 조립된 내시경을 마우스의 항문에 0.5cm 삽입합니다. 겸자의 전체 '턱'(경첩 포함)이 덮개의 끝을 벗어날 때까지 생검 겸자를 직장 내강으로 전진시킵니다(비디오 모니터에서 관찰된 바와 같이). 턱이 동서 방향으로 열리도록 집게를 90° 돌립니다.
6. 생검을 하려면 집게를 열고 약 1cm 전진한 다음 집게를 닫고 한 번의 부드러운 동작으로 집게를 닫은 상태로 빠르게 뒤로 당깁니다.
   1. 생검을 수행할 때 결장을 완전히 주입하지 마십시오. 따라서이 단계에서 가스 밸브의 오른쪽을 열어 두십시오. 겸자를 열면 결장이 이 위치에 있을 때 점막이 손상될 위험이 있다는 점에 유의해야 합니다.

결과

그림 1 : 생검을 수행하는 데 필요한 품목. (A) 렌즈(a), 칼집(b) 및 생검 겸자(c)의 이미지. (B) 렌즈를 피복에 삽입하는 단계. (C) 피복의 작업 채널을 통한 집게 삽입(실선 화살표). 점선 화살표는 공기 펌프를 부착하기 위한 올바른 위치를 나타냅니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
생검 겸자, 3 Fr	칼 스토르츠	61071ZJ
콜로뷰 타워 시스템	칼 스토르츠	회사에 문의
검사 칼집, 9 Fr, 키트	칼 스토르츠	61029DK
홉킨스 망원경, 0', 1.9mm x 10cm	칼 스토르츠	64301AA
이소플루오란	코브트러스	2905
Pawfly MA-60 수족관 펌프	아마존	해당 사항 없음