마우스 회장 루프 모델: 마우스의 장 투과성을 연구하기 위한 수술 모델

초록

출처: Boerner, K., et al. 표준화된 장 루프 모델을 사용한 마우스의 장 투과성 및 호중구 경상피 이동의 기능 평가. J. Vis. 특급 (2021)

이 비디오는 마우스 모델의 장 투과성을 연구하기 위한 회장 루프 모델의 생성을 보여줍니다. 이 방법은 상피 장벽 기능과 그에 따른 면역 반응을 이해하기 위한 라이브 모델을 제공합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 회장 루프의 생성

1. 피부 준비: 70% 에탄올을 적신 알코올 면봉이나 거즈 스펀지로 복부 정중선의 털을 문지릅니다. 저체온증을 예방하기 위해 털의 넓은 부분을 알코올로 적시지 마십시오.
2. 가위를 사용하여 정중선 개복술을 시행합니다. 복부 중앙(길이 약 2cm)을 수직 절개하여 복막을 노출시킵니다. 복강 내 장기를 다치지 않도록 주의한다.
3. 노출된 복강 내강 위에 미리 자른 젖은 면 거즈를 놓습니다.
4. 젖은 면봉을 사용하여 caecum을 움직이고 외부화합니다. 젖은 면 거즈 위에 caecum을 조심스럽게 놓습니다.
   메모: Caecum은 동물의 성별에 관계없이 대부분의 마우스에서 복강의 왼쪽 꼬리 사분면에 국한
되어 있습니다.
5. 젖은 면봉을 사용하여 말단 부분(말단부)이 ceecum에 부착된 회장을 움직이고 부드럽게 외부화합니다(그림 1B).
6. 장간막 혈관과 혈액 공급을 방해하지 않고 젖은 면 거즈에 최소 6cm의 말단 회장을 배치합니다. 출혈이 없는 경우 혈액 공급이 유지되고 조직이 분홍색을 유지합니다(그림 1B).
   메모: 노란색 공급 튜브에 미리 부착된 10mL 주사기를 사용하여 따뜻한 HBSS(2-3분마다)로 조직을 항상 촉촉하게 유지하여 노출된 조직의 건조를 방지합니다.
7. 연골 가까이에서 장간막의 주요 동맥을 확인하여 회장에 혈액을 공급합니다. 그런 다음 장간막에서 중요한 혈관이 없는 두 개의 결찰 부위를 찾습니다.
8. 뭉툭한 조직 겸자를 사용하여 말단 회장(대합에 가장 가까운)을 단단히 잡고 가는 끝 집게를 사용하여 혈관을 피하면서 장간막을 봉합합니다. 천공을 가로질러 실크 봉합사를 놓고 수술 매듭을 묶어 첫 번째 결찰(고리의 말단 끝)을 만듭니다.
9. 눈금자를 사용하여 첫 번째 합자에서 4cm 떨어진 곳을 측정하고 2.8단계(그림 1C)에서 언급한 대로 두 번째 합자(루프의 근위 끝)를 만듭니다.
10. 각 결찰 옆을 조심스럽게 잘라 4cm 회장 고리를 분리하여 혈액 공급과 장간막을 그대로 유지합니다.
    메모: iLoop의 외부 세그먼트의 양쪽 끝을 잘라낸 다음 luminal 내용물(배설물)에 대한 간섭을 방지하는 데 필요한 단계로 부드럽게 플러시하여 분리된 세그먼트의 전체 길이에 걸쳐 FITC-dextran 또는 chemotactic stimuli의 균일한 분산을 촉진할 뿐만 아니라 유세포 분석을 통해 백혈구를 보다 정확하게 정량화할 수 있습니다. 이 절차는 또한 지정된 양의 시약을 주입한 후 점막을 균일하게 팽창시키고 동물 간의 재현성을 향상시킬 수 있습니다.
11. 10mL 주사기에 부착된 유연한 노란색 공급 튜브를 사용하여 따뜻한 HBSS로 회장 루프 세그먼트의 내용물을 부드럽게 세척합니다.
12. 실크 봉합사를 사용하여 플러시 된 회장 루프의 두 절단 끝을 접합합니다.
13. 1mL 주사기와 30G 바늘을 사용하여 FITC-덱스트란 또는 케모카인과 같은 시약 250μL를 장 내강에 천천히 주입합니다. 회장 루프는 팽창하여 점막의 적당한 팽창을 유발합니다(그림 1D).
    메모: 장간막 동맥의 반대쪽에 있는 루프 내강에 시약을 주입합니다. 혈관이 찢어지거나 출혈을 유발하지 않도록 주입하는 동안 동물에서 회장 고리를 뽑지 않도록 주의하십시오.
14. 젖은 면봉을 사용하여 회장 고리, 근위 회장 및 회장을 부드럽게 다시 넣습니다.
15. 바늘 홀더, 해부학적 집게, 3.0 비흡수성 실크 봉합사와 역 절단 바늘을 사용하여 복벽을 닫습니다.
16. 잠복기 동안 동물을 온도 조절식 마취실에 넣습니다.

결과

그림 1 : 회장 루프 모델. (A) 회장 루프 모델의 개략적 개요. 중앙측 개복술은 마취 상태에서 마우스에서 수행되고 온도 조절 수술 보드에 배치됩니다. (B) 세균(caecum)(*), 회장(ileum) 및 장간막(mesentery)의 외관. 결찰을 위한 두 개의 적절한 부위가 확인되었습니다(1,2). (C) 4cm 길이의 세그먼트 분리: 첫 번째 합자(1)는 회장-세균 접합부에 가깝게 배치되고 두 번째 합자(2)는 첫 번째 합자에서 4cm 떨어진 곳에 배치됩니다. (D) 장간막(1, 2)에 두 개의 작은 절개를 만들어 4cm 길이의 회장 고리를 만듭니다. 내강 함량을 제거하고 절단단을 결찰한 후 형광 마커 및 화학 유인제와 같은 시약을 내강에 주입할 수 있습니다. 회장 고리는 혈관이 잘 형성되어 있습니다(검은색 화...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
장비 및 재료
BD 알코올 면봉	BD (영어)	326895
BD PrecisionGlide 바늘, 25G x 5/8"	BD (영어)	305122
BD PrecisionGlide 바늘, 30G x 1/2"	BD (영어)	305106
BD 1ml 투베르쿨린 주사기(바늘 없음	BD (영어)	309659
15ml 원심분리기 튜브	코 닝	14-959-53ᅡ
코닝 96웰 솔리드 블랙 폴리스티렌 마이크로플레이트	피셔사이언티픽	전화: 07-200-592
코닝 무처리 배양 접시, 10cm	밀리포어시그마	CLS430588
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