Mouse Proximal Colon loop Model의 생성: 내강내 주사 후 혈청 내 형광 마커를 검출하여 근위 결장 루프를 생성하고 장 투과성을 측정하는 수술 절차

초록

출처: Boerner, K. et al. 표준화된 장 루프 모델을 사용한 마우스의 장 투과성 및 호중구 경상피 이동의 기능 평가. J. Vis. 특급 (2021).

이 비디오에서는 마우스 근위 결장 루프 또는 pcLoop 세그먼트를 생성하는 수술 절차를 설명한 다음 장 상피 투과성을 연구하기 위해 세그먼트에 형광 마커를 내강 내 주입하는 방법을 설명합니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 근위 결장 고리 (pcLoop)의 생성

1. 피부 준비: 70% 에탄올을 적신 알코올 면봉이나 거즈 스펀지로 복부 정중선의 털을 문지릅니다. 저체온증을 예방하기 위해 털의 넓은 부분을 알코올로 적시지 마십시오.
2. 가위를 사용하여 정중선 개복술을 시행합니다. 복부 중앙(길이 약 2cm)을 수직 절개하여 복막을 노출시킵니다. 복강 내 장기를 다치지 않도록 주의한다.
3. 노출된 복강 내강 위에 미리 자른 젖은 면 거즈를 놓습니다.
4. 젖은 면봉을 사용하여 caecum을 움직이고 외부화합니다. 젖은 면 거즈에 caecum을 조심스럽게 놓습니다.
   메모: Caecum은 동물의 성별에 관계없이 대부분의 마우스에서 복강의 왼쪽 꼬리 사분면에 국한
되어 있습니다.
5. 젖은 면봉을 사용하여 회장 전체를 외부로 꺼내고 젖은 면 거즈 위에 놓습니다. 근위결장과 중결장에 위치한 혈액 공급을 확인합니다. 근위부 결장을 동원하고 미세한 팁 집게를 사용하여 caecum에서 원위로 약 0.5cm 떨어진 중결장에 혈관이 없는 영역에 첫 번째 결찰을 만듭니다(그림 1B).
6. 첫 번째 결자에서 2cm를 측정하고 중결장에서 혈액 공급이 없는 영역에 두 번째 결찰을 만듭니다(그림 1C).
7. 가는 가위를 사용하여 각 결찰 옆을 조심스럽게 잘라 2cm 길이의 pcLoop.
   메모: 각 결찰 옆을 조심스럽게 자른 가위로 4cm 회장 고리를 분리하고 혈액 공급과 장간막을 그대로 유지하면서 내강 내용물을 부드럽게 청소한 pcLoop를 분리하기 위해 양쪽 끝을 자르는 것이 중요합니다. 작은 혈관이 장 내강으로 출혈하는 것을 방지하기 위해 결장 조직과 중결장을 조심스럽게 잘라냅니다. 필요한 경우 열 소작기를 사용하여 절개 부위의 출혈을 제한합니다.
8. 10mL 주사기에 부착된 유연한 노란색 공급 튜브를 사용하여 대변을 제거하기 위해 따뜻한 HBSS로 pcLoop를 부드럽게 세척합니다(따뜻한 HBSS로 채워진 10mL 주사기를 준비하고 노란색 공급 튜브에 부착합니다. 이 주사기는 수술 중 노출된 조직에 수분을 공급하는 데 사용됩니다).
9. 실크 봉합사를 사용하여 플러시된 pcLoop의 두 절단 끝을 접합합니다.
10. 1G 바늘이 있는 30mL 주사기를 사용하여 FITC-dextrans(HBSS의 경우 1mg/mL)와 같은 시약 200μL를 천천히 주입합니다. 사용하지 않은 FITC-dextran 용액을 빛으로부터 보호하여 혈청 채취 후 표준 만곡을 준비하십시오). pcLoop는 팽창하여 점막의 적당한 팽창을 유발합니다(그림 1D).
    메모: 장간막 동맥의 반대쪽에 있는 pcLoop 루멘에 시약을 주입합니다. 동물 간의 일관성을 보장하고 점막이 균일하게 팽창할 수 있도록 2cm 길이의 pcLoop를 만듭니다.
11. 젖은 면봉을 사용하여 결찰된 pcLoop, 회장 및 세움을 복강에 부드럽게 다시 놓습니다.
12. 바늘 홀더, 해부학적 집게, 3.0 비흡수성 실크 봉합사와 역 절단 바늘을 사용하여 복벽을 닫습니다.
13. 잠복기 동안 동물을 온도 조절식 마취실에 넣습니다.

결과

그림 1: 근위 결장 루프 모델. (A) pcLoop 모델의 개략적 개요. 중앙 개복술은 온도 조절 수술 보드에 놓인 마취 상태에서 마우스에서 수행됩니다. (B) caecum (*), 근위 결장, 중결장 및 회장의 외부화. 결찰을 위한 두 개의 적절한 부위가 확인되었습니다(1,2). (C) 첫 번째 결찰자(1)는 세회에 가깝게 배치되고 두 번째 결찰자(2)는 첫 번째 결자에서 2cm 더 원위부에 배치됩니다. (D) pcLoop는 외부화되고 발광 함량이 세척되고 형광 마커 및 화학 유인제와 같은 시약으로 팽창됩니다. pcLoop는 근위 결장의 혈관이 잘 형성된 2cm 분절입니다(검은색 화살촉은 혈액 공...

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
장비 및 재료
BD 알코올 면봉	BD (영어)	326895
BD 1ml 투베르쿨린 주사기(바늘 없음	BD (영어)	309659
BD PrecisionGlide 바늘, 25G x 5/8"	BD (영어)	305122
BD PrecisionGlide 바늘, 30G x 1/2"	BD (영어)	305106
코튼 팁 어플리케이터(면봉), 6인치, 멸균	피셔사이언티픽	25806 2WC
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