근섬유 분리: 수확된 쥐 EDL(Extensor Digitorum Longus) 근육에서 단일 근섬유를 얻는 기술

초록

출처: Hüettner, S.S. et al. 생체 외 성인 근육 줄기 세포 기능 평가를 위한 단일 근섬유 배양 분석. J. Vis. Exp. (2021)

이 비디오는 수확된 쥐 EDL(Extensor Digitorum Longus) 근육에서 단일 근섬유를 분리하는 방법을 보여줍니다. 분리된 근섬유는 근섬유와 관련된 근육 줄기세포 활성을 연구하기 위해 배양할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. EDL 근육 분리 및 콜라겐분해효소 소화

1. 오염을 방지하기 위해 모든 장비에 70% 에탄올을 분사하십시오.
2. 동물 실험에 대한 국가 규정에 따라 마우스를 희생하십시오.
3. 마우스의 뒷다리에 70% 에탄올을 뿌립니다. 경화된 가는 곡선 가위(24mm 절삭날)와 가는 집게(Dumont 7, 곡선 또는 직선)를 사용하여 피부를 제거하고 기저 근육을 노출시킵니다. 밑에 있는 근육이 털과 접촉하지 않도록 하십시오(오염 위험 증가).
4. 기저 근육을 손상시키지 않고 미세한 곡선 집게로 주변 근막을 제거합니다(그림 1A). 구부러지지 않도록 집게를 닫으십시오.
5. 구부러진 집게를 사용하여 TA(경골 전방) 및 EDL 근육의 원위 힘줄을 노출시킵니다. TA를 제거하려면 집게로 원위 TA 힘줄을 잡고 가는 Vannas 스프링 가위(절단면 5mm, 팁 직경 0.35mm)로 자릅니다. TA를 힘줄에 대고 무릎 쪽으로 당기고 무릎에 가까운 근육을 자르면(그림 1B) ....

결과

그림 1. 마우스 EDL 해부 및 단일 근섬유 분리.(A) 쥐 뒷다리의 피부를 제거하고 근막을 둘러싼 근육을 당겨 TA(경골 전방) 근육을 노출시킵니다. (B) TA 근육을 제거하여 흰색 화살표로 표시된 EDL(extensor digitorum longus) 근육을 노출시킵니다. (C) EDL 근육은 힘줄을 절단하여 절개합니다. (D) 두 개의 EDL 근육은 콜라겐 분해 효소입니다. (E) 조직 코어에서 느슨해지는 눈에 보이는 단일 근섬유와 함께 콜라겐분해효소 소화 근육의 모양. (F

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
콜라겐분해효소 유형 1	시그마	C0130
DMEM(4.5g/l 포도당과 피루브산 나트륨을 함유한 Dulbecco의 변형 독수리 배지)	지브코	41966029	세포 배양 배지
소 태아 세럼	지브코	10270-106	소 태아 세럼

년