토끼의 심폐 블록 적출: 토끼 모델에서 기능적 심장-폐 블록을 회수하기 위한 수술 절차

초록

출처: Pacheco-Baltazar, A., et al. 토끼 모델의 고립된 폐 관류 시스템. J. Vis. 특급 (2021)

이 비디오에서는 토끼 모델에서 기능적 심폐 차단을 외과적으로 적출하는 절차를 보여줍니다. 수확된 블록은 추가적인 생리학적, 약리학적 또는 생화학적 연구에 사용할 수 있습니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 장비 및 장치 준비.

1. 장비 배치:
   1. 토끼의 체중에 맞는 크기의 수술대를 설치하십시오.
   2. 인공 흉부의 덮개를 강철 기둥에 장착하고 그 아래에 유리 챔버가 있고 측면에 롤러 펌프가 있는 인공호흡기를 장착합니다.
   3. 더 빠른 연결을 위해 덮개가 기관 캐뉼라가 기관과 일직선이 되도록 쉽게 기울어질 수 있는지 확인하십시오.
2. 인공 흉부 :
   알림: 시스템의 필수적인 부분입니다. 그것은 특별한 덮개로 밀봉된 물 재킷 유리 챔버로 구성되어 있습니다. 덮개는 기관과 그 안에 박혀 있는 혈관을 캐뉼레이션하기 위한 연결부가 있는 기관 홀더 역할을 합니다.
   1. 인공 흉부 내부에 음압을 생성하기 위해 압축 공기로 작동되는 벤츄리 제트를 설정합니다.
      메모: 환기 제어 모듈(VCM)을 사용하면 흡기 및 호기 말 압력, 호흡 속도 및 총 주기 지속 시간에 대한 흡기 지속 시간의 비율을 별도로 조정할 수 있습니다.
3. 기구:
   1. 정상적으로 작동하는 장치가 인공 흉부를 고정하는 베이스 플레이트에 장착된 주 강철 기둥으로 구성되어 있으며, 기압계와 중량 변환기가 그 위와 버블 트랩이 있는 예열 코일 뒤에 있는지 확인합니다.
   2. 차압 트랜스듀서 하나를 뉴모타코미터에 연결하고 다른 하나를 챔버 압력에 연결합니다. 흉부 뒤에 다른 두 개의 압력 변환기를 설정하여 관류와 정맥압을 측정합니다.
   3. 산소 공급기 아래의 전환 재고를 수평 전극과 장치 옆의 환기 시스템으로 연결합니다.

2. 심폐 차단의 외과적 적출.

1. 마취:
   1. 진정제(자일라진)와 바르비투르산염(펜토바르비탈)의 조합을 사용하십시오.
      메모: 다양한 마취 칵테일을 사용할 수 있지만 실험 결과에는 영향을 미치지 않습니다.
   2. 먼저, 자일라진 염산염(3-5mg/kg)을 근육 주사로 1회 주사하여 건강한 뉴질랜드 토끼를 진정시킵니다. 토끼가 침착하고 편안한 상태를 유지하여 주사 후 몇 분 후에 추가 조작을 할 수
   있도록 합니다.
   3. 진정제 투여 후 가장자리(측면) 귀 정맥을 사용하여 펜토바르비탈 나트륨(28mg/kg)을 정맥 주사하여 토끼를 마취합니다.
2. 모니터링:
   1. 불충분한 마취 또는 심장 및 호흡 기능의 과도한 저하를 피하려면 다음 매개변수를 모니터링하십시오. 마취 깊이를 평가하려면 발가락 꼬집음 테스트를 수행합니다.
   2. 점막이 분홍색인지 확인하십시오. 파란색 또는 회색 음영은 저산소증을 나타냅니다.
   3. 심박수가 120-135회/분 사이이고 체온이 36.5°C 이하로 떨어지지 않는지 확인하십시오.
3. 동물 배치:
   1. 토끼의 몸통을 면도하고 동물을 누운 자세로 수술대에 눕힙니다. 인공호흡 시스템을 토끼 머리 뒤의 테이블 근처에 배치하여 기관절개술 후 캐뉼라를 빠르게 연결하여 협골 손상을 방지할 수 있도록 합니다.
4. 절개 및 기관 절개술:
   1. 횡격막에서 목까지 3-5cm의 복부 정중선 절개로 피부를 절개합니다.
   2. 수술용 가위로 두 개의 연골 고리 사이에 있는 기관의 앞쪽 2/3를 잘라 기관 섬유막을 통해 기관 캐뉼라를 삽입합니다.
   3. 5mm(외경; OD) 기관 섬유막을 통해 기관 캐뉼러를 삽입하고 4-0 실크 봉합사를 사용하여 조심스럽게 고정합니다.
   4. 캐뉼라가 기관 쪽으로 구부러지지 않도록 기관 아래에 집게나 핀셋을 놓습니다.
5. 양압 환기:
   1. 폐가 인공 흉부 밖에 있는 한, 수술 중 폐가 허탈하는 것을 방지하기 위해 소형 호흡 펌프를 사용하여 양압을 환기시킵니다.
   2. 기관절개술 직후와 흉부가 열리기 전에 호흡 펌프에 연결된 기관 캐뉼라를 통해 인공호흡을 시작하십시오.
   3. 일회 호흡량을 10mL/kg.
      로 설정합니다. 메모: 실험 설정 및 인공 흉부 모델에 따라 음압을 제공하는 데 사용되는 것과 동일한 환기 펌프 또는 다른 환기 펌프를 통해 양압 환기를 제공하여 빠른 재캐뉼레이션을 제공합니다.
6. 개흉술 및 출혈:
   1. 흉강에 접근하려면 메스나 가위를 사용하여 흉벽을 열고 흉곽의 위쪽 1/3까지 내측 흉골 절개술을 수행합니다.
   2. 두 개의 견인기로 흉부 반쪽을 열어 둡니다. 일반적으로 여러 개의 폐 피판이 심장을 둘러싸고 있습니다.
   3. 상대정맥(superior and inferior vena cava)을 국소화하고 실(thread)로 참조한다.
   4. 동물을 출혈시키기 전에 우심실을 확인하고 1000 UI/kg의 헤파린을 주입합니다.
   5. 주입 직후, 미리 고리가 있는 실로 상대정맥과 하대정맥을 접합하고 출혈을 수행합니다.
7. 심장-폐 수확:
   1. 심폐 차단을 부드럽고 빠르게 채취하십시오. 직접 디지털 박리 또는 스프링 가위를 사용하여 결합 조직을 분리하여 흉부에서 폐를 제거합니다.
   2. 해당 부위의 혈관 구조와 식도를 절개합니다.
   3. 마누브리움 흉골을 절단하여 내측 흉골 절개술을 기관 캐뉼라 쪽으로 확장하면 양쪽의 기관이 연결 조직에서 분리됩니다.
   4. 이제 기관 캐뉼라 위의 기관을 절제합니다. 기관과 폐의 등쪽 고정이 절제됨에 따라 두개골 축에서 캐뉼라를 부드럽게 위로 당깁니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
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IPL-4의 양압 환기용 어댑터	휴고삭스(Hugo Sachs) 일렉트로닉(HSE)	Tel.: 73-4312
IPL-4를 위한 대체 무압력 가스 공급: 음의 환기 시 실내 공기와 다른 가스 혼합물을 기관에 공급합니다	휴고삭스(Hugo Sachs) 일렉트로닉(HSE)	Tel.: 73-4309
Rabbit to Fetal Pig Isolated Perfused Lung의 기본 단위	휴고삭스(Hugo Sachs) 일렉트로닉(HSE)	Tel.: 73-4138
둔감한 혈청 A2: D41 알부민 동결 건조된 분말	시그마	3912	500 지
차동 저압 트랜스듀서 DLP2.5, 범위 +- 2.5 cmH2O, HSE 커넥터	휴고삭스(Hugo Sachs) 일렉트로닉(HSE)	전화: 73-3882
차압 트랜스듀서 MPX, 범위 +- 100 cmH2O, HSE 커넥터	휴고삭스(Hugo Sachs) 일렉트로닉(HSE)	Tel.73-0064
에탄올 앱솔루트 HPLC 등급	칼레돈
Harvard 연동 펌프 P-230 (컨트롤 박스 및 P-230 모터 드라이브 포함)	휴고삭스(Hugo Sachs) 일렉트로닉(HSE)	70-7001
가열식 선형 뉴모타코미터 0 - 10 L/min 유량 범위	휴고삭스(Hugo Sachs) 일렉트로닉(HSE)	전화: 59-9349
단일 기압계용 히터 컨트롤러 230 VAC, 50 Hz	휴고삭스(Hugo Sachs) 일렉트로닉(HSE)	전화: 59-9703
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PLUGSYS VCM-4R 압력 레귤레이터가 있는 환기 제어 모듈	휴고삭스(Hugo Sachs) 일렉트로닉(HSE)	73-1755
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