Cisterna Magna에서 Tracer Molecule 전달: 돼지에서 Cisterna Magna의 직접 캐뉼레이션을 통해 형광 추적 분자를 전달하는 방법

초록

출처: Bèchet, N. B., et al. 돼지의 수조 마그나에 직접 캐뉼라 이식. J. Vis. 특급 (2021).

이 비디오는 돼지 뇌에서 수조 마그나의 직접 캐뉼레이션을 통한 추적 분자 전달 프로토콜을 설명합니다. 이 방법은 임파계에서 뇌척수액의 분포를 시각화하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 캐뉼레이션 및 주입

참고: 이 단계는 최소 두 명이 필요하며 동물의 머리를 높이고 목을 구부린 상태에서 수행됩니다.

1. 외과적으로 접근 가능한 수조(cisterna magna)로 사전 수술된 마취된 돼지로 시작합니다.
2. 한 사람은 동물의 머리와 목을 들어 올리고 구부리는 동안 다른 사람은 수조 마그나를 촉진하여 해부학적 위치를 기록하도록 합니다.
3. 천천히 그리고 조심스럽게 22G 캐뉼라를 경막을 통해 세로 축에 비스듬한 각도로 수조 마그나에 삽입합니다.
   메모: 캐뉼러를 너무 깊숙이 삽입하면 뇌가 손상될 수 있으므로 삽입하지 마십시오. 캐뉼라를 얼마나 멀리 삽입해야 하는지 아는 것은 캐뉼라가 경막을 뚫는 느낌이 어떤지 이해하는 경험을 통해 얻을 수 있습니다. 기본적으로 경막이 뚫린 것처럼 캐뉼러는 성공적인 추적자 주입을 할 수 있을 만큼 충분히 깊습니다. 이 깊이는 약 3-5mm이지만 동물의 크기나 나이에 따라 다릅니다. 성공적인 캐뉼러는 캐뉼라를 오르는 맑고 박동성 CSF의 시각화를 통해 즉시 분명해야 합니다. 최상의 결과를 얻으려면 경막 피어싱에 대한 이해를 얻기 위해 안락사된 동물에서 사전에 여러 번의 캐뉼레이션을 연습하는 것이 좋습니다.
4. 캐뉼러에서 바늘을 집어넣고 잠금 장치에 캡을 씌웁니다.
5. 먼저 캐뉼라가 조직에 들어가는 곳에 초강력 접착제와 촉진제를 적용한 다음 치과용 시멘트를 도포합니다. 시멘트가 굳을 때까지 5분 동안 기다립니다.
6. 캐뉼러에서 캡을 조심스럽게 제거하고 트레이서를 사용하여 10cm 연장된 IV 라인 탭의 수 끝을 캐뉼러에 부착합니다.
7. 손으로 또는 마이크로 주입 펌프를 사용하여 100μL/min의 속도로 추적자를 천천히 주입합니다. 10cm 연장된 3방향 IV 라인 탭을 제거하고 캡으로 교체합니다. 이제 트레이서가 캐뉼라 기저부에서 맥동하는 것을 볼 수 있습니다.
   메모: 손으로 주입하는 경우 치과용 시멘트가 샤프트를 덮고 있는 곳에서 약 1-2mm 위의 캐뉼라 샤프트에서 트레이서가 여전히 보일 때까지 이 작업을 수행합니다.
8. 주사 후에는 굴곡을 유지하기 위해 목 아래에 모래주머니를 놓습니다. 그런 다음 머리를 풀어 놓고 동물을 엎드린 자세로 둡니다.
9. 자체 유지 견인기를 풀고 근육을 이전과 같이 놓습니다. 수술용 수건 클램프를 사용하여 근육 위의 피부를 함께 가져옵니다.
10. 수건 클램프와 절개 부위를 거즈로 덮고 담요를 덮어 열 손실을 제한합니다.
11. i.v. 펜토바르비탈 주사(140mg/kg)로 동물을 안락사시키기 전에 추적자가 원하는 시간 동안 순환하도록 합니다. 청진기로 청진 시 심장음이 들리지 않는 것으로 안락사를 확인합니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
18G 바늘	메디크
1ml 주사기	피셔사이	15849152
20G 캐뉼러	메디크	해당 없음
22G 캐뉼러	메디크	해당 없음
소 혈청 알부민 Alexa-Fluor 647 Conjugate	테르모피셔	A34785	바이알 2개(10mg)
염화칼슘2	시그마알드리치	C1016
치과 용 시멘트	아그토스	7508
포도당	시그마알드리치	G8270
Insta-Set CA 가속기	BSI-주식회사	BSI-151
IV 라인 탭, 10cm 연장이 가능한 3WAY	브브라운	해당 없음
케이클	시그마알드리치	P9333
마커 펜	해당 없음	해당 없음
재질 보기 MgCl2	시그마알드리치	M8266
MilliQ 워터	해당 없음	해당 없음
염화나트륨	시그마알드리치	S7653
나H2PO4	시그마알드리치	S8282 (영어
나HCO3	시그마알드리치	S5761
생리	메디크	해당 없음
자체 유지 리트랙터	해당 없음	해당 없음
초강력 접착제	해당 없음	해당 없음
외과 용 곡선 가위	해당 없음	해당 없음
수술용 수건 클램프	해당 없음	해당 없음

년 (영문) )