토끼의 간질 이상에 대한 다계통 모니터링: 유도 발작 중 동시 비디오 EEG, ECG, 카프노그래피 및 산소 측정 기록 방법

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 토끼가 구속기에 적응하고 조사자가 심폐수의 안정화를 객관적으로 확인할 수 있도록 모든 토끼에게 심폐 및 신경 센서를 계측하고 동물당 1-3회, > 1시간 동안 지속적인 비디오 모니터링을 수행합니다.

2. 정맥 투여 실험 (Pentylenetetrazol, PTZ)

1. 가장자리 귀 정맥을 시각화하려면 토끼 귀의 뒤쪽 표면을 면도합니다. 70% 에탄올 물티슈를 사용하여 부위를 소독하고 가장자리 귀 정맥을 확장하십시오. 이는 그림 1F에서 검은색 점선 타원으로 표시됩니다.
2. 이 시점에서 한 명의 실험자가 토끼의 얼굴을 손으로 가리게 하여 토끼가 받는 절차의 스트레스를 줄이게 합니다. 두 번째 실험자는 멸균 25G 혈관 카테터로 가장자리 귀 정맥을 조심스럽게 캐뉼레이션합니다.
3. 카테터가 정맥에 삽입되면 카테터 끝에 멸균 주사 플러그를 꽂아 바늘이 정맥 주사로 약물을 주입할 수 있도록 합니다. 주입 플러그의 위치는 그림 1G에서 파란색 원으로 표시됩니다.
4. 4 x 4 인치의 거즈를 테이프로 감아 튜브 모양으로 만들고 토끼의 귀 안에 넣어 부목을 만듭니다. 그런 다음 부목을 귀에 테이프로 붙여서 카테터가 제자리에 고정되고 카테터를 삽입하지 않은 귀와 유사하게 똑바로 세워지도록 합니다.
5. 헤파린 처리된 식염수 mL당 10 USP 단위 1mL를 주입합니다.
   메모: 카테터와 혈관은 공기가 눈에 띄게 제거되어야 하며 특허를 받아야 합니다. 카테터가 혈관 안에 있지 않으면 주사기가 쉽게 밀리지 않고 피하 조직에 식염수가 축적됩니다.
6. 토끼에게 10분마다 1mg/kg씩 1mg/kg씩 PTZ를 1mg/kg씩 정맥 주사합니다. 각 투여가 시작될 때 어떤 동물이 주사되고 있는지, 약물의 농도를 표시해 두십시오.
   메모: 이를 통해 PTZ 투여의 급성 및 부가적 효과를 평가할 수 있습니다. 또는 저용량 PTZ의 만성 효과를 추가로 평가하기 위해 토끼는 각 저용량 농도에서 반복 투여, 2mg/kg으로 7회 투여, 5mg/kg으로 3회 투여, 10mg/kg으로 3회 투여, 각 투여량은 10분씩 간격을 둡니다.
7. 각 투여 후에는 신경-심장 전기 및 호흡기 이상과 간질 활동의 시각적 증거가 있는지 비디오-EEG-ECG-카프노그래피-산소 측정법을 주의 깊게 모니터링하십시오. 실시간 및 사후 분석 중에 이러한 변경 사항을 기록하십시오.
   메모: 발작 활동은 종종 PTZ 투여 후 60초 이내에 시작됩니다.

그림 1: 장비에 연결된 토끼.(A) ECG 전극의 위치, 왼팔은 노란색 점으로 표시됩니다. 오른팔은 흰색 점으로 표시됩니다. 왼쪽 다리는 빨간색 점으로 표시됩니다. 오른쪽 다리 앞쪽의 지면은 녹색 점으로 표시됩니다. (B) ECG 및 EEG 전극이 부착된 구속 중인 토끼. (C) 토끼 아래에 부스터, 목 폼 및 절단된 PVC 파이프를 포함하여 더 작은 토끼를 수용할 수 있도록 적절하게 개조된 구속기에 있는 어린 토끼. (D) EEG 전극의 위치와 함께 구속 중인 토끼. 오른쪽 정면은 주황색 점으로 표시됩니다. 왼쪽 정면은 빨간색 점으로 표시됩니다. 오른쪽 후두부는 노란색 점으로 표시됩니다. 왼쪽 후두부는 파란색 점으로 표시됩니다. 참조는 검은색 점으로 표시됩니다. (E) 광자 자극기와 거울 부스 설치로 구속 중인 토끼. 광원은 흰색 점으로 표시됩니다. (F) 토끼의 귀를 면도하고 알코올로 닦은 후의 가장자리 귀 정맥. (G) 왼쪽 가장자리 귀 정맥에 혈관 카테터를 단단히 테이프로 붙인 토끼. 주입 플러그의 위치는 파란색 점으로 표시됩니다. (H) 일방향 판막이 포함된 T-피스에 의해 카프노그래피 튜브에 부착된 안면 마스크가 있는 토끼. (I) 카프노그래피 튜브에 연결된 안면 마스크 및 T-피스의 다이어그램. 인스피레이션하는 동안 실내 공기는 단방향 밸브(녹색 화살표)를 통해 T-피스로 들어갈 수 있습니다. 호기 동안 CO2 는 카프노그래피 튜브(노란색 화살표)로 들어가 T-피스를 떠납니다. 데드 스페이스(dead space)의 양이 적기 때문에 T-피스에 유지되는 CO2 는 매우 적으며 일반적으로 5mmHg 미만입니다.