각막공막 단추 분리: 돼지 눈에서 각막낭 단추를 얻기 위한 수술 절차

초록

출처: Okurowska, K., et al. 세균성 각막염에 대한 약물 치료를 연구하기 위한 돼지 생체 외 각막 모델 구축. J. Vis. 특급 (2020).

이 비디오에서는 각막근막을 외과적으로 분리하여 체외 돼지 각막 모델을 생성하는 절차를 보여줍니다. 이 모델은 인간의 눈과 유사하기 때문에 조직학적, 병리학적, 약리학적 연구에 도움이 됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 살균

1. 중요 단계: Distel의 5%(v/v) 용액을 증류수에 1시간 동안 담가두어 모든 집게와 가위를 소독하고 브러시로 청소하고 수돗물로 헹구고 185°C의 오븐에서 최소 2시간 동안 살균합니다.
2. 121°C에서 15분 동안 고압증기멸균하여 다른 모든 유리 제품 및 시약을 살균하거나 제조업체의 지침에 따라 시약을 준비합니다. 클래스 II 미생물학 안전 캐비닛에서 다음 절차를 수행하십시오.

2. 샘플 수집

1. 돼지 눈동자 모음
   1. 큰 흰색 재래종 암퇘지, 햄프셔 멧돼지가 있는 십자가가 사용되었습니다. 동물들은 전류에 의해 기절되었고 눈은 도살장에서 2시간 후에 적출되었습니다.
   2. 중요 단계: 적출이 완료되면 멸균 인산염 완충 식염수(PBS) 용액에 눈을 넣어 건조를 방지하고 도착 즉시 처리합니다.

3. 각막 단추의 준비

1. 멸균 집게를 사용하여 안구를 둘러싼 조직을 잡고 페트리 접시에 옮깁니다. 페트리 접시에서 메스 칼날 번호 15와 집게를 사용하여 안구 주위의 결막과 근육 조직을 제거합니다.
2. 집게로 시신경을 잡은 상태에서 안구를 부드럽게 들어 올려 멸균 PBS로 채워진 0.5L 병으로 옮깁니다.
3. 모든 눈에서 주변 조직이 제거되면 멸균 집게를 사용하여 PBS에 3%(v/v) 포비돈 요오드를 채운 다른 0.5L 병으로 눈을 옮기고 1분 동안 그대로 둡니다.
4. 멸균 PBS가 있는 다른 0.5L 용기로 안구를 옮깁니다.
5. 집게를 사용하여 페트리 접시에 눈을 고정하고 메스 칼날 번호 10A로 각막 근처를 자릅니다.
6. 중요한 단계: 절단된 부분의 가장자리를 잡고 가위를 사용하여 각막을 둘러싼 공막을 약 3mm의 공막으로 절제합니다. 가위의 날카로운 끝이 홍채나 맥락막 조직을 뚫지 않고 맥락막 상 공간에 있는지 확인하십시오.
7. 집게로 각막 단추를 잡고 다른 뾰족한 끝 집게를 사용하여 포도막 조직을 부드럽게 분리합니다.
8. 남아 있는 글로브에서 각막 단추를 들어 올리고 12웰 플레이트에 PBS의 1.5%(v/v) 포비돈 요오드 용액으로 잠시 헹굽니다.
9. 각막 단추를 멸균 PBS로 채워진 다른 12웰 플레이트에 넣습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Cellstar 12웰 플레이트	Greiner 바이오 원	665180
디스텔	피셔 사이언티픽	12899357
집게	피셔 사이언티픽	15307805
PBS (PBS)	증권 시세	P4417
페트리 접시	피셔 사이언티픽	12664785
포비돈 요오드	Weldricks 약국	2122828
메스 칼날 번호 15	피셔 사이언티픽	O305
메스 스완 모튼	피셔 사이언티픽	11849002

표시기