토끼 간암 생성 모델: 간세포 암종 유도를 위해 간의 좌엽에 종양 조직을 이식하는 수술

초록

출처: Khabbaz, R. C. et al. 간암에 대한 Rabbit VX2 모델의 개발 및 혈관 조영술 사용. J. Vis. 특급 (2019)

이 비디오에서는 간세포 암종을 유도하기 위해 토끼 간에 종양 조직을 이식하는 수술을 보여줍니다. 이 절차는 종양 행동을 연구하고 간암을 표적으로 하는 국소 치료법 개발을 연구하기 위한 신뢰할 수 있는 동물 모델을 확립하는 데 도움이 됩니다.

프로토콜

동물 모델과 관련된 모든 절차는 지역 기관 동물 관리 위원회와 JoVE 수의학 검토 위원회에서 검토되었습니다.

1. 개복술을 통한 간 종양 이식

1. 개복술을 위해 수혜자 토끼를 준비합니다. 유도를 위해 45mg/kg 케타민과 5mg/kg 자일라진을 사용하여 수혜자 토끼를 마취한 후 필요에 따라 1%–3% 이소플루란으로 삽관 및 유지 관리를 수행합니다. 토끼가 마취되면 이발기를 사용하여 수술 부위를 면도합니다. 베타딘 스크럽, 70% 에탄올 용액, 베타딘 용액을 삼중 세척하여 절개 부위를 청소하고 무균 수술 방식으로 복부를 드레이프합니다.
2. #15 블레이드를 사용하여 xiphoid process에서 시작하여 토끼의 피부를 통해 작은 아래쪽 수직 정중선 절개를 만들어 개복술을 시작합니다. 이것은 쉽게 촉진되어야 하며 대략 미국 페니 크기인 경향이 있습니다. 그림 1을 참조하십시오.
3. 피부를 반사하고 linea alba를 식별합니다. 이것은 정중선에서 아래쪽으로 이동하는 반사되는 흰색 조직 띠여야 합니다. 둔기 절개를 사용하여 linea alba를 횡단하고 복막을 노출시킵니다. 그림 2를 참조하십시오.
   메모: 복막은 호흡과 함께 움직이는 것을 볼 수 있는 장 바로 위에 있기 때문에 쉽게 식별할 수 있습니다.
   주의: 복막은 표면 장력으로 인해 기저에 있는 장에 부착되는 경향이 있습니다. 둔기에 의한 외상을 사용하여 알바선(linea alba)을 절개하면 밑에 있는 장을 천공할 위험을 없애는 데 도움이 됩니다.
4. 복막이 노출되면 조심스럽게 절개하여 복막강으로 들어갑니다. 이제 간을 식별할 수 있습니다. 복부 공간을 더 잘 탐색하려면 정중선 절개를 피부, 근육 및 복막을 통해 아래쪽으로 1\u20122cm 연장합니다.
   메모: 정중선 절개 부위를 연장하는 것은 곡선 끝이 표면적으로 복막을 향하도록 하여 복막 공간에 곡선 지혈을 조심스럽게 삽입하면 쉽고 안전하게 수행할 수 있습니다. 그런 다음 지혈제를 약간 열고 칼날을 사용하여 지혈제의 두 팔 사이의 조직을 귀여워합니다.
5. 종양 이식 부위를 선택하기 위해 간의 좌엽을 확인합니다. 좌엽은 정중선에 있는 내측엽보다 하측입니다.
6. 복막 공간에서 간을 빼내려고 시도하기 전에 절개 부위의 아래쪽에 마른 거즈 조각을 놓습니다.
   메모: 거즈는 간이 복부로 다시 수축하는 것을 방지하기 위해 간을 놓을 수 있는 접착 표면을 제공합니다.
7. 외상성 겸자나 젖은 거즈를 사용하여 절개 부위를 통해 복부에서 간의 왼쪽 엽을 조심스럽게 뽑아내고 앞서 놓은 마른 거즈 위에 놓습니다. 그림 3을 참조하십시오.
   주의: 간낭은 민감하여 쉽게 파열될 수 있습니다. 이 기관을 다룰 때는 수정체 출혈, 간 타박상 및/또는 궁극적인 혈복막을 예방하기 위해 부드럽게 다루는 것이 중요합니다.
   메모: 일반적으로 간은 복막 공간에 들어갈 때 시각적으로 자신을 선언합니다. 그러나 토끼의 위가 팽창하면 간이 두개골로 시야에서 밀려날 수 있습니다. 이 경우 뭉툭한 프로브를 사용하여 복벽을 부드럽게 들어 올립니다. 이 시나리오에서 간은 표면 장력으로 인해 횡격막의 복부 측면에 달라붙는 경향이 있으므로 무딘 프로브를 사용하여 간을 조심스럽게 분리하고 분리해야 합니다. 그런 다음 외상성 겸자를 사용하여 간을 뽑아냅니다.
8. 이 시점에서 이식을 위해 종양 조직을 준비하고 간을 보호하기 위해 젖은 거즈 조각을 간에 씌웁니다.
9. 간에 이식하기 위해^1-3mm의 전처리된 종양 조직을 선택합니다. 그림 4를 참조하십시오.
10. #11 블레이드를 사용하여 간 조직을 45° 각도로 뚫어 0.5cm 깊이의 주머니를 만들고 간 캡슐의 등쪽 측면을 관통하지 않도록 주의합니다. 펑크를 낸 후 날을 제자리에 두십시오. 그림 5를 참조하십시오.
11. 칼날을 복부 방향으로 부드럽게 들어 올려 간 침대에 작은 주머니를 만듭니다. 집게를 사용하여 종양 조각을 잡고 이 주머니에 종양 조각을 넣은 다음 칼날을 제거합니다.
    메모: 종양 조각을 삽입하기 전에 칼날을 제거할 수 있지만 간에서 출혈이 발생하여 천자 부위가 가려져 식별하기 어려울 수 있습니다.
    주의: 의도하지 않은 종양 파종을 방지하기 위해 종양과 다른 구조와의 접촉을 최소화해야 합니다. 이것은 또한 나중에 이식을 돕기 위해 사용되는 도구를 따로 보관함으로써 피할 수 있습니다.
12. 이 시점에서 젤 폼과 같은 지혈제 조각을 종양 주머니 위에 올려 지혈을 촉진하고 종양 조각의 배출을 방지합니다.
13. 지혈이 확인되면 간을 복부로 되돌립니다.
14. 간단한 연속 스티치를 사용하여 테이퍼 바늘에 3-0 폴리다이옥사논 봉합사로 복벽을 닫고 연속 피하 스티치를 사용하여 절단 바늘에 4-0 폴리글락틴 910 봉합사로 피부를 닫습니다.
    주의: 복벽을 닫을 때 봉합사로 망막이나 다른 장 구조가 손상되지 않도록 주의하십시오.

결과

그림 1: 노출된 xiphoid process. 피부와 밑에 있는 근육이 반사되어 xiphoid 돌기(검은색 화살표)와 장(흰색 화살표)을 시각화할 수 있습니다. 흰색 별은 두개골 방향을 나타냅니다.

그림 2: Linea alba. 피부와 근막 위에 반사되어 두개골에서 꼬리 방향으로 달리는 linea alba(검은색 화살표)를 시각화할 수 있습니다. 이 영역은 무혈관성이며 복막 공간을 출혈 없이 이용할 수 있습니다.

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
이발기	왈	41870-0438
케타민	헨리 샤인	56344
자일라진	아콘	59399-110-20
곡선 지혈	WPI (영어)	501288
비외상성 겸자	스클라	52-5077
사	메드라인	NON21430LF
15날	스테리스	전화: 02-050-015
11-블레이드	스테리스	02-050-011
서지셀	에티콘	1951
3-0 PDS/테이퍼	에티콘	Z305H
4-0 비크릴/커팅	에티콘	J392H

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